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《福建农林大学》 2010年
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三种昆虫病原线虫Enolase基因的克隆、原核表达及功能研究

高秋峰  
【摘要】: 昆虫病原线虫是害虫生物防治中的的重要因子,在农业生产中发挥着重要作用;而Enolase是糖酵解途径中的一个关键酶;近年来的研究表明,Enolase是一个多功能蛋白,在某些病原生物的入侵过程中发挥着重要作用。本研究选取芫菁夜蛾线虫(Steinernema feltiae)、小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)和印度小杆线虫(Heterorhabditis indica)三种昆虫病原线虫,对它们的Enolase进行了基因的克隆、表达及生物学功能的初步研究。 1应用RT-PCR和RACE技术克隆了三种昆虫病原线虫Enolase的全长cDNA序列。其中芫菁夜蛾线虫Enolase cDNA序列全长1453 bp,最大开放阅读框为1311 bp,编码436个氨基酸;推测蛋白等电点和相对分子质量分别为5.67和47309.82;GenBank登录号为HM067751。小卷蛾斯氏线虫Enolase cDNA序列全长1405 bp,最大开放阅读框为1311 bp,编码436个氨基酸;推测蛋白等电点和相对分子质量分别为5.59和47154.61;GenBank登录号为HM067752。印度小杆线虫Enolase cDNA序列全长1615 bp,最大开放阅读框为1305 bp,编码434个氨基酸;推测蛋白等电点和相对分子质量分别为5.43和47268.63;GenBank登录号为HM067750。同时还构建了9种线虫Enolase基于氨基酸序列的系统发育树,并对它们的氨基酸序列进行了多序列比对。 2分别构建了三种昆虫病原线虫Enolase基因的GST融合表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达;同时对这三个表达蛋白进行了纯化,最终获得大量高纯度的重组表达蛋白。 3进行了三种重组表达Enolase生物学功能的初步研究;Western blot结果表明芫菁夜蛾线虫Enolase能够在其体表表达;酶活性测定结果表明三种Enolase均具有糖酵解酶酶学活性,能够催化2-PGA和PEP之间的可逆反应;免疫抑制试验结果表明三种Enolase均能够在不同程度上抑制大蜡螟血细胞的吞噬和包被作用;Far western blot结果表明三种重组Enolase均能与血纤溶酶原进行结合。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S476.15

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【参考文献】
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