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《集美大学》 2015年
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盐酸克伦特罗胶体金免疫层析试纸条制备与应用

马静  
【摘要】:盐酸克伦特罗是临床治疗咳喘病的药物,近年来有研究显示,它可以促进脂肪组织转化为蛋白质,提高瘦肉率,被非法用于猪、羊等家畜饲养。当人体摄入一定量的盐酸克伦特罗后,造成体内代谢紊乱,增加脏器负担,严重者危及生命。免疫胶体金是一种新兴的免疫检测技术,在多领域应用,耗时少、灵敏度好、特异性强,在现代食品检测工作中发挥重要作用。本实验进行CLB胶体金免疫层析试纸条制备,并应用于动物生鲜组织及动物性加工食品(如猪肉松、牛肉干)中CLB检测。首先采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,对比不同浓度还原剂制得的胶体金在400~700 nm紫外扫描最大吸收峰,结果表明,在还原剂质量一定的情况下,还原剂浓度对金颗粒影响较小,选择1%柠檬酸三钠1.8 m L,制备胶体金在520 nm处具有最大吸收峰,粒径约为18.41 nm。试纸条制备工艺如下:(1)优化金标抗体制备条件:最佳抗体标记量为4.5μg/m L,最适p H为0.2 mol/L K2CO3添加量3μL/m L,并确定封闭液为1%BSA,封闭温度4℃。(2)选择金标抗体复溶液配方:0.01 mol/L p H 7.4PB,终浓度为1%BSA、10%蔗糖、0.5%PEG20000的混合液。(3)二抗与包被抗原最适匹配浓度为1.0 mg/m L、0.2 mg/m L;同时优化包被抗原稀释液,最终确定用0.01 mol/L p H7.4 PBS。(4)稀释倍数选择:选择金标液稀释倍数3倍。(5)金标垫与样品垫选择及预处理:金标垫类型选择玻纤型纤维素膜0194;将金标垫0194与玻纤型样品垫GL-b04分别用胶体金液实验,由于质地略有差异,玻纤型样品垫GL-b04溶液扩散效果更好;样品垫处理液配方优化:0.01 mol/L p H 7.4 PB、终浓度为1%蔗糖、1%吐温-20。(6)NC膜选择:对比三种型号的硝酸纤维素膜(AE99、Millipore 180、SS24),以性能最佳的作为试纸条NC膜,即Millipore 180。(7)试纸条性能:灵敏度为8 ng/m L,与莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林和马布特罗无交叉反应,特异性好;试纸条在室温下可存放60天;相同批次间试纸条随机抽取进行阴性、阳性检测,结果正确,性能一致,重复性好,不同批次间抽取半数(30个)试纸条检测,合格率在97%以上。对新鲜动物组织(包括动物肌肉、肝脏)及动物性加工食品的前处理方法:取2 g均质样品,用5 m L 0.2 mol/L盐酸-4%Na Cl沉淀蛋白,上清液保留,加入1 m L 1 mol/L Na OH,4~5 g Na Cl,10 m L乙酸乙酯萃取上清液中CLB,65℃氮吹干,用1 m L 0.01 mol/L乙酸铵或p H 7.4 PBS复溶,检测模拟加标样品时,当CLB在猪肉、猪肉松和动物肝脏中不低于15 ng/g,牛肉干中不低于20 ng/g时可被检出。
【学位授予单位】:集美大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:TS251.7

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