微囊藻毒素与原发性肝癌的关系研究

【摘要】：[目的] 利用RNAi技术沉默XRCC1基因,测定微囊藻毒素-LR对BRL-3A细胞增殖和DNA损伤的影响,探讨XRCC1在微囊藻毒素致损伤修复中的作用。通过流行病学调查,探讨福建省福州地区饮水类型、炎性体信号通路相关miRNA多态性与原发性肝癌的关系。 [方法] 1 RNAi技术沉默BRL-3A细胞XRCC1的表达,通过荧光定量PCR检测转染后12h、24h及48h XRCC1的表达变化。 2分别以0、2、6、10μg/ml MC-LR染毒XRCC1沉默的大鼠肝细胞、正常大鼠细胞及错义siRNA转染的细胞4h、8h和16h,用CCK-8试剂盒检测大鼠肝细胞增殖与凋亡情况。 3分别以0、2、6、10μg/ml MC-LR染毒XRCC1沉默的大鼠肝细胞、正常大鼠细胞及错义siRNA转染的细胞4h、8h和16h,用荧光定量PCR检测PARP-1表达量的变化。 4分别以0、2、6、10μg/ml MC-LR染毒XRCC1沉默的大鼠肝细胞、正常大鼠细胞及错义siRNA转染的细胞,同时,利用MMS为阳性对照,以相同的浓度梯度对正常大鼠细胞染毒16h,进行彗星实验。 5采用病例对照研究,收集病人226例,对照235例,通过问卷调查获取生活饮食等信息,应用logistic回归模型,评价肝癌的危险因素,并计算OR及其95%可信区间。 6应用分子流行病学研究方法,采用两阶段病例对照设计,采集病例与对照的外周血,提取DNA,以MALDI-TOF-MS质谱检测技术对炎性体信号通路相关microRNA多态性进行检测,用非条件Logistic回归模型计算基因多态性与肝癌风险的OR值及其95%可信区间。 [结果] 1瞬时RNAi技术成功抑制XRCC1的表达,在转染12h、24h及48h后XRCC1的抑制效率分别为34.5%、64.4%及62.9%。 2染毒2μg/ml时,三组细胞三个时间点的细胞增殖活性差别不具统计学意义。染毒6μg/ml,染毒16h后,siRNA-XRCC1组细胞增殖活力与正常细胞组相比,差异具有统计学意义。染毒剂量10μg/ml,染毒8h和16h后,siRNA-XRCC1组细胞增殖活力与两个对照组相比均有统计学差异,细胞增殖活力均降低。 3染毒MC-LR 2μg/ml 4h时,相比两个对照组,siRNA-XRCC1组PARP-1表达量增加;染毒2μg/ml时,siRNA-XRCC1组PARP-1随着染毒时间延长,PARP-1表达量下降;染毒4h时,siRNA-XRCC1 10μg/ml组PARP-1表达量相对于siRNA-XRCC1 2μg/ml组降低。 4各剂量组与本细胞组0μg/ml组相比,尾距增大,且差异具有统计学意义(P0.05)。siRNA-XRCC1组无论与正常细胞组还是与错义siRNA组相比较均有差别,说明XRCC1沉默细胞对MC-LR的毒性更敏感。阳性对照组各剂量组与0μg/ml组相比,尾距的差异亦有统计学意义,说明本次彗星实验成功,条件不存在问题。 5多因素logistic回归分析得肝癌的危险因素:乙肝病史(OR=164.799)、饮用沟塘水(OR=8.750);保护因素为饮用泉水(OR=0.136)、深井水(OR=0.028)、喝茶(≥1次/天)(OR=0.143)、吃粗粮1次及以上(OR1=0.031, OR2=0.034, OR3=0.012)。 6共显性模型下,rs2168709 GG携带者肝癌危险度是携带TT或TG携带者的1.782倍(95%CI,1.033-3.074); rs11807848 TC携带者是TT或CC携带者的1.622倍(95%CI,1.088-2.418)。显性模型下rs11807848位点TC或CC携带者患肝癌的危险性是TT携带者的1.665倍(95%CI,1.138-2.436)。在隐性模型下, rs2168709纯合突变基因型携带者罹患肝癌的风险是TT或TC基因型携带者的1.786倍(95%CI,1.044-3.053);rs17175796位点GG基因型携带者罹患肝癌的风险是TT或TG携带者的1.621倍(95%CI,1.002-2.624)。 [结论] 1微囊藻毒素可明显抑制XRCC1沉默细胞的增殖;低浓度短时间MC-LR染毒可促进PARP-1表达,高剂量长时间染毒则使PARP-1表达下降;MC-LR可致DNA损伤。 2乙肝、饮用沟塘水为肝癌的主要危险因素,饮泉水、深井水及经常喝茶是肝癌的主要保护因素。

【关键词】：RNA干扰 X线交错互补修复基因1 miRNA多态性 炎性体 原发性肝癌
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R735.7
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