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脂肪来源干细胞移植改善大鼠脑缺血后血管再生及其机制的实验研究

林菲菲  
【摘要】:目的:观察脂肪来源干细胞(Adipose-derived Stem Cells,ADSCs)移植改善大鼠脑缺血后血管再生的情况;通过检测脂肪来源干细胞移植前后,大鼠脑缺血周边区Notch1-Dll4信号通路表达的变化,来探讨该信号通路在ADSCs移植促进脑缺血周边区血管再生中的作用,为ADSCs治疗缺血性卒中提供实验依据。 方法:贴壁筛选法分离、培养、纯化ADSCs,移植前予DAPI进行标记;将65只成年雄性SD大鼠随机分为:假手术组(Sham组),模型组(MCAO组),ADSCs干预组(ADSCs组),ADSCs+DAPT干预组(DAPT组);参考改良Zea-Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型;ADSCs干预组及ADSCs+DAPT干预组分别于造模成功后24h在脑立体定位仪作用下经侧脑室注入ADSCs或含γ分泌酶抑制剂DAPT(Notch信号通路特异性抑制剂)的ADSCs;分别于术后4d、7d、14d、28d断头取脑,计数各组脑缺血周边区微血管数量;采用免疫荧光组织化学法、Western印迹法检测Notch1、Dll4、Hes1的表达。 结果:ADSCs移植后在脑梗死灶周围可观察到散在分布的DAPI染色的阳性细胞。ADSCs干预组大鼠脑缺血周边区的微血管数量明显多于MCAO组(P0.05)及ADSCs+DAPT干预组(P0.05);ADSCs干预组大鼠Notch1、Dll4、Hes1蛋白表达水平较MCAO组及ADSCs+DAPT干预组明显增高(P0.05)。 结论: 1、ADSCs移植可明显促进大鼠脑缺血周边区微血管增生; 2、ADSCs移植可上调Notch1-Dll4信号通路的表达,这种促进作用可以被Notch信号通路特异性抑制剂DAPT所抑制; 3、ADSCs移植的促脑缺血周边区血管再生的作用可能与上调Notch1-Dll4信号通路的表达有关。


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