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《福建医科大学》 2011年
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人精子甘露糖受体不同探针标记的比较研究

张艳  
【摘要】:人类生殖调控是生命科学的重要研究领域。其中精子与卵子结合的受精过程是备受瞩目的研究热点。受精过程是一个由许多分子参与的多步骤复杂过程,其分子机制至今尚未得到完全阐明。在参与受精过程的分子中,人精子甘露糖受体(human sperm Mannose receptor,hsMR)可能是人精子与卵母细胞识别、结合和融合等环节密切相关的分子,值得特别关注。 目前已经对hsMR的分布、生化特性及生理功能等方面进行了研究。但是对hsMR的定性还不明确,关于hsMR分子量的描述也不同,从27KDa到160KDa不等。已知hsMR是人精子中一种可以识别并结合甘露糖的分子,并与精卵相互作用有一定关系。近年还有个别研究认为hsMR可能就是人巨噬细胞甘露糖受体(Human macrophage Mannose receptor, hmMR,,又称CD206),并在介导HIV-1病毒的传播中可能起一定作用。但从进化角度来看,精子中的甘露糖受体的存在不可能仅为介导病毒的传播,很可能与受精或其它生理功能有关。hsMR是否就是CD206?不同分子量的候选分子与精子的不同生理状态是否有关?目前尚不明了。因此,本研究对不同生理状态的精子,分别采用D-甘露糖基化白蛋白(D-Mannosylated albumin,DMA)和抗CD-206抗体(anti-CD206)为探针,运用蛋白质斑点杂交实验、SDS-PAGE电泳、蛋白质免疫印迹杂交实验、荧光免疫细胞化学、亲和层析和Pull-Down分离和质谱分析等实验,了解靶分子的分子属性,以便进一步揭示人精子中甘露糖受体的本质特征。 结果显示,斑点杂交的试验证明,DMA探针和anti-CD206抗体分别与Con A或CD206斑点特异性地结合。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的不同探针对诱导顶体反应的精子进行荧光标记,并通过荧光显微镜观察,结果显示DMA-FITC标记的精子赤道段或顶体区有典型的荧光,而用抗CD206抗体-FITC探针则观察不到典型的荧光。新鲜精液中的精子头、尾均存在甘露糖结合蛋白,随着获能进展,尾部的结合活性显著降低。蛋白质免疫印迹杂交结果显示人获能精子萃取液在72KDa处有一条明显的条带能与DMA特异结合,但并不与CD206抗体结合。说明精子萃取液中含有能与甘露糖结合的分子,但可能不存在与人巨噬细胞甘露糖受体同源的成分。 综上所述,得出以下结论: 1.人精子中具有与甘露糖结合活性的蛋白有两种,分子量分别为27Kda和72Kda; 2. 27Kda蛋白(SAP)可能是男性生殖道分泌的精浆蛋白吸附在精子表面(尤其是尾部)的产物,而72Kda蛋白则可能是精子顶体反应后才暴露到赤道带并可能在精子-卵母细胞相互识别-结合中其介导作用的人精子甘露糖受体hsMR。 3.人精子细胞中不存在与人巨噬细胞甘露糖受体(CD206)相同的分子。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R321

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