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《福建医科大学》 2011年
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DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响

石丽芳  
【摘要】:目的:本文采用转染基因真核表达载体技术将pBudCE4.1-DLL4通过Lipofectamine 2000转染慢性髓细胞白血病细胞株K562,观察Notch的配体DLL4在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及K562细胞生长的影响,进而研究在这个通路中转录因子YY1是否活化,参与Notch信号通路及其对c-Myc和白血病细胞生长情况的作用。 方法:试验分三组:正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。用脂质体Lipofectamine 2000法将各组质粒转染白血病细胞,①转染48小时后,收集各组细胞,用RIPA裂解细胞,免疫印记法(Westen bolt)检测外源性DLL4瞬时转染的表达水平和各组细胞中YY1和c-Myc蛋白的表达水平;②转染48小时后,收集各组细胞,细胞涂片用间接免疫细胞化学法检测各组细胞中YY1和c-Myc蛋白的表达水平;③用Cell Counting Kit-8法检测各组光吸收值;转染后48小时后,用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布情况和凋亡。 结果:通过Lipofectamine 2000,体外成功地将各组质粒转染入K562细胞,48小时后,①用Westen bolt检测到各组K562细胞外源性Dll4、YY1和c-Myc蛋白的表达,用Quantity 0ne软件行半定量分析,用SPSS统计软件进行数据处理及分析,实验组的DLL4、YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多,且p0.05,有统计学意义。②用间接免疫细胞化学技术检测到各组K562细胞YY1与c-Myc蛋白的表达,秩和检验比较:实验组YY1和c-Myc蛋白表达量与两个对照组比较显著增多,p0.05,有统计学意义。③做各组K562细胞的生长曲线,实验组K562细胞的生长速度明显低于两个对照组;经流式细胞仪检测,实验组较对照组G0/G1期细胞增多,p0.001,凋亡率增加,p0.001,有统计学意义。 结论:重组质粒pBudCE4.1-DLL4体外转染白血病细胞K562后,DLL4的蛋白表达量增多,并引起细胞转录因子YY1蛋白量表达增多,原癌基因c-Myc的蛋白表达量增加,K562细胞的生长速度减慢、诱导细胞周期停滞于G0/G1期和凋亡,而由DLL4引起的c-Myc蛋白表达增高对于K562细胞的生长没有促进作用。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R733.7

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【引证文献】
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