收藏本站
《福建医科大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究

方碧清  
【摘要】:目的:探讨表皮干细胞向神经细胞分化的影响因素。 方法: 1.分离3-4天的SD大鼠表皮基底层细胞,利用10分钟贴壁法分离出表皮干细胞。2,用免疫组织化学法测定K15、β1整合素、CD34和巢蛋白(nestin)来鉴定培养出的表皮干细胞。3.加入不同的培养基:K-SFM、NEUROBASALTM-A和DMEM培养分离出的表皮干细胞,并观察不同培养基组细胞形态的变化。4.通过调整不同浓度的bFGF,观察表皮干细胞的形态变化。5.用K-SFM为培养基培养表皮干细胞,以表皮干细胞的细胞密度分组,分为0.5×10~7/ml组、0.3×10~7/ml组、0.1×10~7/ml组、0.5×105/ml,每组均加入20ng/ml的bFGF,观察其细胞形态发生以及细胞标记物的改变。 结果: 1.利用十分钟贴壁法成功分离出表皮干细胞。分离出来表皮干细胞细胞密度大,细胞呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大,其特征性标记分子K15及β整合素表达阳性。 2.表皮干细胞在NEUROBASALTM-A和DMEM培养基中均出现细胞体积增大,细胞膜边界不清,细胞核溶解、核碎裂、细胞死亡。 3.表皮干细胞在K-SFM培养基中,加入bFGF的浓度为0ng/ ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml时,细胞形态没有明显改变,呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大;当加入的bFGF浓度为20ng/ml时, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。 4.在0.3×10~7/ml组和0.1×10~7/ml组, 24h-48h可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第5-6天可看到部分细胞呈铺路石样改变,细胞体积大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,部分细胞呈出现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞增多。免疫组织化学nestin、NSE染色阳性,β1整合素、CD34染色阴性; 0.5×10~6/ml组,约3-4天后可见到散在的伸展,呈多角形、圆形或短棒样的细胞,大部分细胞一直未伸展; 0.5×10~7/ml组, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。 结论 1.10分钟快速贴壁法可以培养出表皮干细胞,表皮干细胞的特征性标记分子K15及β1整合素表达阳性,CD34、nestin表达阴性。 3.培养表皮干细胞细胞的最佳培养基为K-SFM。 4.通过bFGF可诱导表皮干细胞向神经系分化,bFGF对表皮干细胞的诱导具有细胞密度依赖性。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R329

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 陈慧萍;李倩如;张静;杜英;杨波;李国喜;胡祥;董子明;;利用基因芯片分析碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血干细胞CD34~+与CD133~+细胞基因表达的差异[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年01期
2 刘晓刚;邓宇斌;蔡辉;;碱性成纤维细胞生长因子与猴骨髓间充质干细胞增殖及向神经元前体细胞分化:不同质量浓度对诱导剂隐丹参酮作用有差异吗?[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年10期
3 吕先念;王卫淑;;碱性成纤维细胞因子与心脑血管疾病关系[J];中国药物与临床;2007年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 高松哲;陈剑;王彦平;肖盼;宋子宣;阮余霞;杨筱曦;吴静;唐光霞;;碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响[J];热带医学杂志;2011年05期
2 赵庆杰;李倩如;杜英;张清勇;李国喜;胡祥;;人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠细胞免疫功能的影响(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年23期
3 和小娥;任卫青;邓立新;何俊丹;秦佳晨;吕婧玉;曹桂彬;王新庄;;生长因子对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响[J];畜牧兽医学报;2012年04期
4 刘晓刚;邓宇斌;蔡辉;王丽宁;马郁琳;张新鹏;魏可心;;控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植可减少脊髓损伤后空洞形成[J];中国组织工程研究;2013年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 田嵘榛;参麦注射液对脑缺血再灌注大鼠血管再生神经细胞增殖影响的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
2 侯仙明;和血生络法对实验性心肌梗死大鼠的促血管新生作用及机制研究[D];河北医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 和小娥;兔骨髓间充质干细胞分离培养及定向分化的研究[D];河南农业大学;2011年
2 龚圆渊;六味地黄丸联合bFGF诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究[D];成都中医药大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙晓艳;范洪学;;骨髓间充质干细胞的研究进展[J];吉林医学;2007年02期
2 谢荣禄;碱性成纤维细胞生长因子与冠心病的关系[J];中国动脉硬化杂志;1999年02期
3 刘晓刚,邓宇斌,刘祖国,朱文标,王建云,张成;神经元样细胞与控释神经营养因子联合移植对脊髓损伤猴后索结构修复和功能恢复的作用[J];中国临床康复;2005年26期
4 刘晓刚;邓宇斌;蔡辉;马郁琳;徐红兰;;控释胶质细胞源性神经营养因子对骨髓间质干细胞源性神经元样细胞移植修复猴脊髓轴突的协同作用[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年11期
5 刘晓刚;邓宇斌;蔡辉;马郁琳;徐红兰;;控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植对猴损伤脊髓髓鞘的修复[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年32期
6 洪鸣;李建勇;钱思轩;吴汉新;陆化;张闰;张晓艳;徐卫;;异基因造血干细胞移植后免疫重建临床研究[J];中国实验血液学杂志;2008年05期
7 郑翠玲;郭振兴;韩忠朝;周毓玲;卢士红;任倩;陆敏;;脐血CD34~+细胞和外周血单个核细胞中HOXB4基因表达及其启动子区CpG岛甲基化状态的研究[J];中国实验血液学杂志;2009年03期
8 原清涛,邓宇斌,刘晓刚,胡军,李树浓,刘祖国;隐丹参酮诱导猴骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞[J];中国病理生理杂志;2005年05期
9 王晓红,姜志胜,迪丽努尔·莎比托夫,庞永政,刘初峰,唐朝枢;碱性成纤维细胞生长因子对兔血管舒张功能及左旋精氨酸/一氧化氮途径的影响[J];中国病理生理杂志;1999年03期
10 王颖;邓宇斌;王晔;李艳;;MSCs源性神经元细胞移植对脑梗死模型鼠学习记忆功能的影响[J];中风与神经疾病杂志;2005年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈东来,庞晓纲;表皮干细胞的生物学特性与临床应用研究进展[J];中国美容医学;2005年05期
2 黄晖,赖西南,王正国,王丽丽,陈志雄;感觉神经肽P物质在表皮干细胞分化中作用的实验研究[J];中华烧伤杂志;2004年05期
3 高艳红,裴雪涛;皮肤干细胞的研究现状与应用前景[J];中华烧伤杂志;2003年01期
4 刘虎仙;贾赤宇;付小兵;谢晓繁;;表皮干细胞来源、分布及其在创面愈合中的作用[J];中华创伤杂志;2006年03期
5 付国强;人类毛囊膨胀部细胞具有生化特性和表皮干细胞的表型[J];国外医学.皮肤性病学分册;2001年02期
6 牛云飞,路卫,夏照帆;表皮干细胞的分离及鉴定[J];第二军医大学学报;2004年08期
7 田田;李英春;;胚胎干细胞源性表皮干细胞的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2008年04期
8 刘洋;李建福;付小兵;孙同柱;郭建军;李海红;;压应力对体外培养的表皮干细胞增殖分化的影响[J];中国病理生理杂志;2006年05期
9 赵喜彬;杨松林;;表皮干细胞用于瘢痕治疗的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2009年06期
10 李富;付小兵;刘文忠;;人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展[J];感染.炎症.修复;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王冰梅;葛香连;林程琳;宋颖楠;张彦定;;诱导人表皮干细胞向成釉质细胞分化[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
2 张杨;李秀兰;华云旗;;表皮干细胞与毛囊干细胞生物学特性比较[A];第十五次全国中西医结合疡科学术交流会论文汇编[C];2011年
3 李孝建;沈雁;张志;曾耀英;李延仓;杨小红;;鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
4 朱飞滨;刘德伍;张红艳;彭燕;钟清玲;李勇铁;;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
5 白晓智;张战凤;赵周婷;蔡维霞;石继红;汤朝武;朱雄翔;胡大海;;热损伤后表皮细胞培养上清诱导脂肪干细胞向表皮干细胞表型转分化的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
6 陶克;陈璧;丁国斌;谢松涛;王洪涛;胡大海;;联合应用3-甲基-1-异丁基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松对人胎儿表皮干细胞的诱导分化作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 钟清玲;刘繁荣;刘德伍;;表皮干细胞向皮肤附件诱导分化研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
8 谢晓繁;刘虎仙;付小兵;贾赤宇;;表皮干细胞分离和鉴定的研究进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 彭燕;彭青;蔡爱英;刘德伍;钟清玲;蓝蔚;;表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
10 廖立新;陈刚泉;李国辉;李剑;;以表皮干细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张献怀;我国创伤修复研究取得新进展[N];中国医药报;2009年
2 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗获新进展[N];大众科技报;2009年
3 刘霞;科学家在毛囊中发现“皮肤干细胞之母”[N];科技日报;2010年
4 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗取得新进展[N];科技日报;2009年
5 记者 涂端玉 通讯员 陈景荣 钟志勇;巨型老鼠体内注有马骝基因[N];广州日报;2007年
6 记者 邰举;韩从伤口组织提取皮肤干细胞获成功[N];科技日报;2009年
7 记者 白毅;我学者揭示皮肤干细胞衰老新机制[N];中国医药报;2011年
8 记者 施嘉奇 通讯员 王姿英;探索中药对干细胞分化的作用[N];文汇报;2009年
9 张献怀;创伤修复研究发现三种生物学现象[N];健康报;2009年
10 王姿英;中英合作中药调控干细胞分化研究启动[N];中国医药报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 尹德龙;表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制研究[D];华中科技大学;2012年
2 王联群;hTERT基因在人表皮干细胞中的表达与调控研究[D];南昌大学;2010年
3 李美蓉;表皮干细胞多向分化潜能特征的发现及其相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 李孝建;鼠表皮干细胞培养体系及构建组织工程皮肤的研究[D];暨南大学;2009年
5 纪世召;模拟干细胞Niche同步实现表皮干细胞扩增与皮肤替代物构建的实验研究[D];第二军医大学;2012年
6 韩军涛;胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及其在表皮和毛囊再生中的作用[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 李娟;Kruppel样因子4(KLF4)在小鼠表皮干细胞中的表达和功能研究[D];华中科技大学;2011年
8 李力;生物电场促进皮肤创面修复的细胞机制[D];第三军医大学;2012年
9 钟清玲;糖尿病大鼠表皮干细胞β-catenin和cyclinD1的表达及其在创面修复中的作用研究[D];南昌大学;2011年
10 赵志力;去分化表皮细胞重获再生表皮能力的研究[D];第三军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 方碧清;碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究[D];福建医科大学;2011年
2 杨青;毛囊干细胞和表皮干细胞生物学特性的比较研究[D];天津医科大学;2012年
3 陈萌;免疫荧光双标法应用于小鼠表皮干细胞分子标记的筛选[D];山东大学;2011年
4 詹日兴;一氧化氮在烧伤后表皮干细胞离巢迁移中作用的实验研究[D];第三军医大学;2012年
5 李云剑;培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响[D];南京医科大学;2010年
6 陈兰;龟板有效成分对胎鼠表皮干细胞凋亡的影响[D];广州中医药大学;2011年
7 朱飞滨;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生的实验研究[D];南昌大学;2011年
8 陈季玲;急性β射线皮肤损伤创面及其表皮干细胞变化的实验研究[D];南华大学;2012年
9 孙薇;P311促进烧伤创面表皮干细胞迁移的实验研究[D];第三军医大学;2012年
10 李欣;不同条件下银屑病患者表皮干细胞分离、培养、鉴定及生物学特性的初步研究[D];山西医科大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026