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《福建医科大学》 2011年
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sCD44分子对POAG小梁网细胞凋亡的影响及相关凋亡信号通路的研究

梁宗宝  
【摘要】:目的探讨不同浓度的可溶性CD44分子(soluble CD44,sCD44)对原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)小梁网细胞凋亡及其凋亡调节蛋白Bcl-2相关死亡因子Bad蛋白表达的影响,研究sCD44与POAG发病的关系。 方法采用组织块培养法原代培养POAG小梁网细胞,运用透射电镜,免疫细胞化学等方法对细胞进行鉴定,观察其生物学特性。取传3代的小梁网细胞分别加入含sCD44终浓度为0ng/ml(对照组),1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml的无血清培养基,分别培养24小时后收集细胞,采用CCK-8、荧光显微镜、流式细胞仪和ELISA,研究sCD44对POAG小梁网细胞凋亡及其凋亡调节蛋白Bcl-2相关死亡因子Bad蛋白表达的影响。 结果1.组织块经培养7天左右,可见细胞从其边缘开始向外生长,倒置显微镜下可见细胞形态多样,呈梭形、圆形、椭圆形等。电镜见细胞呈圆形或椭圆形,表面较多微绒毛,细胞之间的连接主要为缝隙连接,胞质内多见次级溶酶体、粗面内质网、线粒体;2.免疫细胞化学法检测纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和神经元烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE)染色阳性,而阴性对照不着色;3.通过CCK-8法检测发现:随着sCD44终浓度的增加,sCD44对POAG小梁网细胞的抑制作用增强,且各实验组之间以及实验组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);4.通过荧光显微镜观察显示随着sCD44终浓度的增加,早期和晚期凋亡细胞量明显增多;5.通过流式细胞仪法检测sCD44终浓度为1ng/ml,5 ng/ml,10ng/ml,25ng/ml,50 ng/ml干预的实验组小梁网细胞凋亡率分别为(10.7283±0.0223),(17.3267±0.0250),(21.1483±0.0248),(25.1267±0.0281),(29.9900±0.0335),均高于对照组小梁网细胞凋亡率(2.5550±0.0187),且各实验组之间以及实验组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);6.ELISA法检测sCD44终浓度为1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25ng/ml,50ng/ml干预的实验组小梁网细胞Bad蛋白浓度值分别为(89.9392±2.5995)pg/ml,(109.7353±3.9992) pg/ml,(120.1332±3.3993)pg/ml,(160.1252±5.3989)pg/ml, (220.5131±4.7990)pg/ml,均高于对照组(71.1430±0.3999)pg/ml,且各实验组之间以及实验组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。 结论1.采用组织块体外培养法能成功培养出原发性开角型青光眼小梁网细胞;2. sCD44可以抑制POAG小梁网细胞的增殖,促进细胞凋亡,且在一定范围内呈现一定的剂量依赖性;3. sCD44可以促进细胞凋亡调节蛋白Bcl-2相关死亡因子Bad蛋白的表达,对小梁网细胞凋亡可以通过内源性线粒体途径起作用。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R775

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