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活化的小胶质细胞表达炎症相关因子及其受体的动态研究

张锋  
【摘要】: 目的:观察小鼠小胶质细胞在脂多糖(LPS)刺激下表达炎性趋化性细胞因子MCP—1及其受体CCR2,抗炎性趋化性细胞因子FKN及其受体CX3CRl的影响,观察LPS诱导小鼠小胶质细胞表达促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β升高的作用。观察β-淀粉蛋白、M-CSF对小胶质细胞分泌TNF-α的作用。 方法:小鼠小胶质细胞株N9以含5%小牛血清的DMEM高糖培养基传代培养。以液氮冻存复苏后的N9作为第一代,选样第3-8代N9进行体外实验。本研究包括2个部分:(1)以LPS干预N9,分别于1hour,4hour,12hour,24hour收集细胞培养上清和贴壁细胞,对照组选用未以LPS干预的N9细胞。通过ELISA法检测培养上清中TNF-α的含量,以半定量RT-PCR法检测N9表达MCP-1及具受体CCR2,FKN及其受体CX3CR1,TNF-α和IL—1βmRNA的水平,并观察LPSF干预后以上指标随时间的动态变化。 (2)β-淀粉蛋白、M-CSF分别或联合干预N9,作川24hour后收集细胞培养上清,ELISA法检测培养上清中TNF-α的含量。 结果:(1)以LPS干预体外培养的小胶质细胞,趋化性细胞因子MCP-1在LPS作用12h后明显升高,24h时已有下降;趋化性细胞因子FKN在LPS作用12h后持续升高。炎性趋化性细胞因子MCP-1的—过性升高与抗炎性趋化性细胞因子FKN的持续增加显示了二者的区别。趋化性细胞因子受体CCR2和CX3CRl在LPS作用4h时下降最明显,之后逐渐恢复。细胞因子TNF-α在4h时达到峰值,IL-1β在LPS作用1h时即见升高,说明促炎性细胞因子TNF-α和IL-lβ的升高早于趋化性细胞因子MCP-1和FKN。 (2)β-淀粉蛋白单独,或其与协同因子M-CSF联合干预没有显示明显的促小胶质细胞分泌FNF-α的作用。 结论:活化的小胶质细胞可能以增加分泌炎症因子和抗炎症因了的方式,参与中枢神经系统炎症进程的调节。


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