神经干细胞移植及其对脊髓损伤后细胞凋亡的影响
【摘要】：目的:通过观察大鼠行为学的改变及脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经细胞凋亡的情况,了解神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植对损伤脊髓功能修复的作用和对SCI大鼠神经细胞凋亡的影响,为临床治疗提供实验依据。
方法:①脊髓NSCs的培养和鉴定由福建医科大学分子生物中心完成;②SD大鼠88只,随机分成11组(n=8):假手术组、脊髓损伤组(简称:损伤组,包括伤后1天组、3天组、7天组、14天组、21天组)和损伤后移植干细胞组(简称:移植组,包括伤后1天组、3天组、7天组、14天组、21天组)。③改良Allen法建立大鼠SCI模型;④利用立体定位技术在脊髓损伤部位移植体外BrdU标记的NSCs;⑤损伤后用Gale联合评分法(the combine behavioral score,CBS)检测脊髓损伤大鼠行为改变;⑥免疫组化法检测SCI后TUNEL染色、bax及bcl-2的表达;⑦免疫荧光组织化学方法,观察NSCs的存活、整合等情况。
结果:①从新生大鼠脊髓分离的细胞群具有连续克隆能力,表达Nestin蛋白;②SCI后从14天开始,移植组CBS评分高于损伤组(p0.05);③SCI后1天TUNEL染色明显,7天达高峰,14天仍较明显,21天降低;移植组凋亡指数(Apoptotic
Index,AI)显著低于损伤组(p0.05);④SCI后bcl-2、bax蛋白的表达均稳步上升(灰度值降低),14天开始下降;损伤组bcl-2与bax的灰度值之比(bcl-2/bax)大于移植组,即凋亡程度高于移植组(p0.05)。⑤移植组和损伤组的bcl-2/bax与细胞凋亡指数AI做相关性分析两者均里显著性正相关;⑥BrdU标记的NSCs移植入SCI大鼠脊髓后21天,能存活。
结论:①改良Allen法所造成大鼠脊髓损伤属脊髓不完全损伤,是研究急、慢性脊髓损伤的较好模型;②神经干细胞在损伤脊髓内能存活,并与脊髓组织整合;③神经干细胞移植能提高脊髓损伤大鼠后肢功能恢复的程度;④神经干细胞可能通过促进bcl-2的表达、抑制bax的表达从而减少脊髓损伤后细胞凋亡,起保护作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R651.2
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