收藏本站
《福建医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

构建神经生长因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

蔡鹏  
【摘要】: 目的: 1.优化大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells,rBMSCs)体外分离、培养、纯化、扩增的方法。 2.将构建成功的含有神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因的慢病毒载体感染大鼠骨髓间充质干细胞,并观察神经生长因子在骨髓间充质干细胞中的表达,为下一步在动物体内进行基因治疗提供基础。 方法: 1.全骨髓贴壁培养法行rBMSCs提取、分离、培养,用低糖DMEM+10%胎牛血清作为细胞培养基,倒置显微镜下观察rBMSCs形态及生长,通过传代纯化和扩增,至第二代以后每次传代时取部分细胞分装冻存。 2.取第三代rBMSCs流式细胞学鉴定其表面CD标记并进行成骨、成脂诱导分化鉴定。 3.以含有NGF基因的慢病毒载体和含有GFP的慢病毒空载体(作为实验对照),感染靶细胞rBMSCs,倒置荧光显微镜下观察感染后的rBMSCs中GFP表达情况。 4.以慢病毒空载体做对照,取感染后的rBMSCs培养液上清采用ELISA检测rBMSCs中NGF蛋白的表达。 5.以慢病毒空载体做对照,取感染后的rBMSCs提取RNA后行实时荧光定量PCR检测rBMSCs NGF基因mRNA水平的表达。 结果: 1.全骨髓培养法采集和扩增的rBMSCs生长良好并稳定传代,细胞培养至第3代后呈现比较均一的长梭形、成纤维状形态。流式细胞仪检测扩增后的rBMSCs表面抗原特征,结果表明rBMSCs强表达干细胞表面标记CD44、CD90、CD106,而弱表达甚至不表达造血干细胞特异抗原CD34、CD45等,并且能向成骨、成脂诱导分化,证实为非造血干细胞的另一类干细胞。 2.在感染入含神经生长因子基因的慢病毒载体的rBMSCs中,应用实时荧光定量PCR可检测到NGF前体基因的mRNA,其培养液上清应用ELISA方法可检测到NGF蛋白。 结论: 1.通过全骨髓培养法贴壁筛选成功获取了大量高纯度大鼠骨髓间充质干细胞,可满足进一步体内外实验需求。 2.成功利用慢病毒载体将NGF基因转移至大鼠骨髓间充质干细胞,感染后的细胞可分泌出NGF蛋白,为下一步进行体内基因治疗研究提供了较为理想的基因修饰细胞。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R450

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周琼;汤永红;赵书鹤;陈艳华;欧大明;;神经生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞[J];国际神经病学神经外科学杂志;2007年05期
2 冯士军;;NGF联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤[J];中国现代医学杂志;2011年08期
3 施永彦;喻爱喜;张功礼;余永桂;邓长康;潘国栋;;腺病毒介导神经生长因子在绿色荧光蛋白基因标记的间充质干细胞中表达及意义[J];中华实验外科杂志;2006年05期
4 池君;宋武战;张学渊;;腺病毒介导小鼠神经生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达[J];听力学及言语疾病杂志;2007年06期
5 侯剑峰;张浩;袁昕;符韶鹏;魏英杰;胡盛寿;;低强度激光照射对大鼠骨髓间充质干细胞生物学性状影响的实验研究[J];中国激光医学杂志;2009年04期
6 邬伟;闫峻;张艳梅;张昱;王小同;孙晶;;人参皂苷Rg1诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用[J];中风与神经疾病杂志;2007年03期
7 黄文燕;何俊峰;龙大宏;;神经生长因子转染骨髓间充质干细胞诱导分化成神经样细胞[J];解剖学研究;2007年03期
8 陈良;刘阳;;骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤区NGF与BDNF表达的影响[J];四川医学;2011年03期
9 朱小虎,陈霞平,阮绪芝;小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究[J];中国中医骨伤科杂志;2005年05期
10 董锋;林建华;吴朝阳;;骨髓间充质干细胞尾静脉移植脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子及神经生长因子的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 舒雨雁;李晓飚;廖共山;雷丹青;张学荣;;中华眼镜蛇毒神经生长因子的研究[A];广西生物化学与分子生物学会第六次学术研讨会论文摘要[C];2003年
2 董文心;;神经生长因子与阿尔茨海默氏病[A];中国药理学会第九届制药工业药理学术会议论文摘要汇编[C];2000年
3 曹晓建;;神经生长因子对脊髓损伤保护作用机制的实验研究[A];中国康复医学会全国运动疗法学术会议暨心脑血管病康复研讨班论文汇编[C];2000年
4 舒雨雁;;中华眼镜蛇毒神经生长因子的研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
5 苏志鹏;吴哲褒;;垂体腺瘤患者血清神经生长因子水平的测定[A];2009年浙江省神经外科学术年会论文汇编[C];2009年
6 刘宇鹏;赵德伟;崔旭;王卫明;孙强;;神经生长因子在大鼠骨折部位的表达[A];2009年全国骨与关节损伤新技术研讨会暨第六届股骨头缺血性坏死修复与再造学习班论文汇编[C];2009年
7 马可;蒋立新;曹桂群;刘旭阳;;神经生长因子对角膜神经机械性损伤后修复作用的研究[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
8 汤渝玲;胡成平;冯俊涛;朱锦琪;林敏娟;;c-fos RNAi技术对神经生长因子Ras-MAPK信号通路的影响[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
9 鞠辉;冯艺;杨拔贤;;神经生长因子在大鼠坐骨神经冷冻致神经病理性疼痛中的作用[A];中华医学会疼痛学分会第七届年会论文摘要集[C];2007年
10 夏荣华;陈敬国;黄惠娟;郑铠军;陈简;杨秀芳;叶春华;林蔷;;神经生长因子早期干预对HIE患儿IL-6影响的研究[A];全国围产医学专题学术研讨会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 孙洪涛;世界首个神经生长因子产品获国家批准[N];医药经济报;2003年
2 记者 刘海英;神经生长因子有助修复受损心肌[N];科技日报;2010年
3 赵炜;骨髓间充质干细胞可减轻排异反应[N];健康报;2004年
4 通讯员卫建国;“火炬”照亮生命之光[N];科技日报;2003年
5 记者 韩璐;“神经生长因子”获国家一类新药证书[N];科技日报;2001年
6 邵建国;抗神经生长因子单抗何去何从[N];医药经济报;2010年
7 杨希;注射用神经生长因子喜获国家一类新药证书[N];医药经济报;2001年
8 唐亚强 陈杰;注射用神经生长因子首批产品问世[N];医药经济报;2003年
9 本报记者何世文;治疗神经损伤有了新药[N];科技日报;2003年
10 本报记者 吴洁;为实现“人体配件工厂”的梦想[N];科技日报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李海生;低氧促进人骨髓间充质干细胞增殖和分化及其机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
2 史达;木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的实验与相关临床研究[D];广州中医药大学;2007年
3 顾绍峰;兔骨髓间充质干细胞分化为角膜上皮样细胞的体外研究[D];中国医科大学;2008年
4 张伟;骨髓间充质干细胞免疫调节机制的研究[D];中国协和医科大学;2004年
5 张海峰;骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭治疗作用的实验研究[D];山东大学;2007年
6 牟大鹏;抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞诱导分化前后差异表达基因[D];吉林大学;2007年
7 景红;大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为肾脏系膜细胞样细胞的实验研究[D];中国协和医科大学;2008年
8 宋可新;黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程皮肤的初步研究[D];中国协和医科大学;2008年
9 滕春燕;骨髓间充质干细胞对急性胰腺炎损伤修复及其机制的实验研究[D];吉林大学;2009年
10 任晓勇;人生长分化因子-5基因转染骨髓间充质干细胞及用于软骨缺损修复的初步研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡鹏;构建神经生长因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究[D];福建医科大学;2009年
2 周琼;NGF体外诱导hMSCs分化为神经元样细胞[D];南华大学;2008年
3 陈书尚;骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的实验研究[D];福建医科大学;2005年
4 刘宏志;大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经前体细胞的研究[D];中国医科大学;2005年
5 王艳芳;生物反应器内培养兔骨髓间充质干细胞[D];大连理工大学;2006年
6 陈洁;同种异体移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠心梗后心室重构[D];浙江大学;2006年
7 刘弘光;尝试移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病[D];中国医科大学;2006年
8 董玉泉;兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究[D];青岛大学;2006年
9 项正兵;人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元样细胞定向分化的实验研究[D];南昌大学;2007年
10 周哲;骨髓间充质干细胞bFGF复合降解膜修复皮肤缺损的研究[D];吉林大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026