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《福建医科大学》 2009年
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视网膜色素上皮细胞培养上清液联合视黄酸对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

冯月兰  
【摘要】: 目的探讨人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium, HRPE)细胞培养上清液联合全反视黄酸(all-trans Retinoid Acid,RA)对骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells.BMSCs)诱导分化的影响。 方法实验分3组:HRPE+RA+ BMSCs共培养组、HRPE+ BMSCs共培养组,和对照组(单独BMSCs)。体外培养人视网膜色素上皮细胞(HRPE)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),取第2代HRPE和第3代BMSCs接种于Transwell双层培养板内共培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,采用免疫细胞化学染色、RT-PCR检测胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物烯醇化酶(NSE)、光感受器特异性标志视紫质(Rhodopsin)在诱导细胞中的表达。 结果共培养两周后的细胞置倒置相差显微镜下观察: HRPE培养上清液+BMSCs+RA组在诱导14天后,BMSCs出现较多的长突起,部分细胞发生迁移并相互之间建立突触联系。不加RA则分化细胞明显较少,也少有建立突触联系的细胞;免疫细胞化学染色显示: HRPE培养上清液+BMSCs+RA组不但能诱导BMSCs更多的表达GFAP(OD:0.347.士0.057)、NSE(OD:0.261士0.058)、部分细胞还表达光感受器细胞特异性标志Rhodopsin(OD:0.216士0.066)。将三种培养条件下所表达的阳性细胞分别进行统计学分析,组间差异有统计学意义(GFAP: F =68.969、P 0.001;NSE: F =48.672、P 0.001;Rhodopsin:F =24.34、P 0.001)。RT-PCR鉴定结果显示同样结果。 结论HRPE培养上清液+BMSCs+RA可以诱导BMSCs向神经胶质细胞、神经元与视细胞分化。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R774.1

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