收藏本站
《福建医科大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

RNAi沉默Notch1、Notch2对人胶质瘤U251细胞增殖的影响及其机制

张明芳  
【摘要】: 神经胶质瘤是最常见的颅内肿瘤,高级别胶质瘤的预后通常很差,因此,探讨胶质瘤的分子机制,研究新的靶向治疗手段就显得十分重要。Notch信号是胶质瘤发病机制的新研究靶点。为深入了解Notch信号通路在神经胶质瘤发生中的作用,探讨沉默Notch治疗神经胶质瘤这一可能的基因治疗方法,本研究利用Notch1-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选获得Notch1基因稳定沉默的胶质瘤细胞单克隆,对其体内外增殖能力进行研究,并采用基因表达谱芯片技术,分析沉默Notch1对胶质瘤U251细胞的基因表达谱的影响。此外,本研究合成了Notch2的特异siRNA序列,并采用慢病毒介导的RNAi技术研究Notch2基因沉默对胶质瘤U251细胞的体外增殖能力影响,以比较Notch1与Notch2在胶质瘤中功能的异同点。 本研究的第一部分采用实时定量PCR筛选有效的Notch2 siRNA序列,构建Notch2-shRNA慢病毒载体,进行病毒包装,结果成功包装出表达Notch2-shRNA和阴性对照shRNA的慢病毒,滴度分别为3.7×10~5TU/ml和2.5×10~5TU/ml。 本研究的第二部分采用本实验室原有的Notch1-shRNA慢病毒和第一部分生产的Notch2-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选稳定低表达Notch1和Notch2的细胞单克隆,实时定量PCR检测Notch1和Notch2 mRNA的表达,Western-blot法检测细胞Notch1和Notch2蛋白的表达;结果成功筛选得到Notch1和Notch2稳定沉默的U251细胞单克隆。 本研究的第三部分采用CCK-8法测定细胞生长;平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;裸鼠种植瘤模型观察Notch1沉默对种植瘤生长的影响。结果显示Notch1稳定沉默组的增殖与对照组相比明显减慢;Notch1沉默组的平板克隆形成率为(18.6±2.5)%,低于对照组(37.0±3.3)%;Notch1沉默组软琼脂集落形成率(51±5)%,低于对照组(80±4)%;Notch1沉默组裸鼠腋下种植瘤生长速度减慢,30天后瘤重(0.31±0.09)g,明显低于对照组(2.35±0.71)g;统计学分析均有显著意义。而Notch2沉默对细胞增殖无影响。 本研究的第四部分采用基因芯片技术,分析Notch1稳定沉默对U251基因表达谱的影响。结果显示Notch1稳定沉默细胞与对照细胞间的差异表达基因共有775个,涉及细胞增殖与分化、细胞周期、细胞通讯与粘附、糖脂代谢、MAPK信号转导、TGF-β信号转导等多个方面,而Notch1沉默抑制肿瘤的机制可能和细胞周期调控以及TGF-β信号有关。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R739.4

手机知网App
【共引文献】
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈旭;异常Notch3通路在人卵巢癌发病机制中的作用研究[D];华中科技大学;2011年
2 邹宇辉;γ-secretase抑制剂阻断Notch信号通道抗胶质瘤新生血管的作用研究[D];第二军医大学;2011年
3 张华;胰岛素样生长因子-1对PC12细胞APP代谢和BACE-1表达的影响及其机制的研究[D];重庆医科大学;2011年
4 许鹏;脑胶质瘤中Notch信号通路异常的实验研究[D];天津医科大学;2011年
5 何雯婷;Notch信号通路关键因子的表达及受体阻断对胃癌细胞生物学行为的影响[D];兰州大学;2011年
6 张翠萍;低氧对神经干细胞增殖和分化的影响及HIF-1的作用机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
7 王凡;低氧预处理或HIF-1α基因修饰的成肌细胞移植治疗心肌梗死的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
8 李翔;低氧对成肌细胞体外分化的影响及其机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
9 王茜;Notch和Wnt信号通路与髓母细胞瘤的生长与治疗[D];大连医科大学;2008年
10 吴万福;HIF-1α对脑梗死后神经干细胞增殖、迁移与分化的影响及机制的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李科志;RNA干扰技术在绞股蓝鲨烯合酶基因功能研究中的应用[D];广西医科大学;2011年
2 王一男;多西他赛联合卡铂对宫颈癌新辅助化疗的近期疗效观察[D];吉林大学;2011年
3 杨春秀;Notch基因过表达对K562细胞增殖影响及相关机制研究[D];重庆医科大学;2011年
4 张娜;Notch1及其配体JAG1基因甲基化在乳腺癌发病中的作用以及种族之间的差异[D];石河子大学;2010年
5 花本林;Notch信号分子在乳腺癌和乳腺增生性病变中的表达及其意义[D];石河子大学;2009年
6 蒋星星;ENT1在人肝癌细胞中的表达特征[D];南昌大学;2011年
7 万春霞;白英水提取液诱导人大肠癌HT29细胞凋亡及其机制研究[D];南昌大学;2011年
8 付强;针刺和神经干细胞联合治疗实验性脑性瘫痪的机制研究[D];广州医学院;2011年
9 吴萍;脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胚胎干细胞的毒性作用[D];泰山医学院;2011年
10 任松涛;靶向沉默Notch-1的腺相关病毒载体的构建及其对人胶质瘤肿瘤干细胞成瘤性的影响[D];青岛大学;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026