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虎尾轮根黄酮类提取物的制备及体外抗肿瘤作用的初步研究

饶澄  
【摘要】: 目的制备虎尾轮根黄酮类提取物,观察其对肿瘤细胞的体外抑制作用。方法95%乙醇回流提取制备虎尾轮根粗提物,D101型大孔吸附树脂纯化得到黄酮类提取物。以芦丁为对照品,通过对粗提物和黄酮类提取物在不同络合条件下的紫外-可见光谱扫描,选择合适的含量测定方法。以黄酮类含量为指标,用动态吸附法比较4种大孔吸附树脂的吸附率和解吸率,筛选出从粗提物中富集黄酮类的最佳树脂类型,并对实验条件进行优化,纯化粗提物中的黄酮。MTT法观察虎尾轮根提取物对CA46、NB4、AGS和BEL-7404细胞生长的影响;用Hoechst 33258染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡情况;用TUNEL法测定细胞凋亡率。结果运用氯化铝-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.2)比色法,虎尾轮根粗提物、黄酮类提取物和芦丁光谱峰形相似,在405 nm处均有明显吸收,线性回归方程为D=24.338c+0.0043,r=0.9996,n=5(D:吸光度,c:浓度(μg·mL- 1)),芦丁浓度在0.008~0.04 mg·mL-1范围内线性关系良好;重复性实验RSD3% (n=6);络合物吸光度60分钟内稳定,RSD1%(n=6);平均回收率99.59%。ADS-17型树脂对虎尾轮根黄酮类有较好的吸附和解吸效果,其最佳工艺条件为:上样浓度0.8 mg·mL-1,吸附流速2 mL·min-1,30%~90%乙醇溶液梯度洗脱。虎尾轮根粗提物中黄酮类含量为13.6%,ADS-17树脂纯化后黄酮类提取物中黄酮类含量为63.3%。MTT测定结果显示,粗提物及黄酮类提取物均可抑制CA46、NB4、AGS和BEL-7404细胞的增殖,黄酮类提取物的抑制作用更强,与粗提物相比差异显著(P0.01),且抑制作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。四种细胞中以AGS细胞受到的抑制作用最明显。虎尾轮根黄酮类能引起AGS细胞凋亡,凋亡率与正常对照组相比,12.8μg·mL-1组差异有显著性(P0.05);32、80、200、500μg·mL-1组差异有非常显著性(P0.01)。结论:虎尾轮根黄酮类的含量以氯化铝-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.2)比色法测定;经ADS-17型大孔树脂富集的虎尾轮根黄酮类提取物能抑制体外培养的细胞并诱导凋亡。虎尾轮根抗肿瘤作用的物质基础可能存在于黄酮类提取物中。


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