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《福建医科大学》 2010年
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乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

陈炬莹  
【摘要】: 背景: 随着肿瘤生物学及动物细胞培养技术的发展,人们逐渐认识到在肿瘤细胞群中,存在一小部分细胞具有自我更新、多向分化和稳态控制等特性,是肿瘤复发转移的根源,提出了肿瘤干细胞假说,国内外学者对肿瘤干细胞分离鉴定做了很多尝试。乳腺癌是异质性很明显的恶性肿瘤,是女性最常见的恶性肿瘤之一,本实验对不同乳腺癌细胞系中乳腺癌干细胞相关亚群的分离鉴定及其性质做了初步的研究。 目的: 通过乳腺癌细胞系及其干细胞相关亚群的细胞培养,采用化疗药物干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。 方法: 1.通过细胞培养不同生物学特性的乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,添加或不加TA化疗药物(多西紫杉醇和表柔比星),观察生长曲线,比较其生长情况; 2.利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例; 3.添加或不添加TA方案化疗药的无血清培养液培养这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。 4.两细胞系对化疗药的敏感性用两独立样本t检验,以P0.05为差异有统计学意义,采用SPSS13.0统计软件分析数据。 结果: 1.MCF-7、MDA-MB-231细胞生长曲线的比较:MCF-7细胞第5天进入对数生长期,第7天进入平台期;而MDA-MB-231细胞第3天就进入对数生长期,第8天进入平台期。提示MDA-MB-231细胞倍增时间短,生长速度快于MCF-7细胞,生物行为较差。 2.两细胞系加入TA药物后生长曲线的比较:第一天两细胞系大部分细胞死亡,生长速度缓慢,而第二天MCF-7细胞生长速度逐渐恢复,间接反映MCF-7细胞系中可能存在部分细胞,具化疗抵制,能自我更新,适应新的微环境。化疗药物敏感性取两独立样本t检验,MCF-7细胞系P0.05,没有统计学意义,提示该方案敏感性差;MDA-MB-231细胞系P0.05,有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗药敏感。 3.无血清悬浮培养两种乳腺癌细胞系:MDA-MB-231细胞系中大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约第6天出现细胞球,之后部分肿瘤细胞逐渐死亡。加入TA化疗药物筛选后,见两细胞系细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球。 4.流式细胞仪检测乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例:MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要表型为CD44+CD24+亚群和CD44-CD24+亚群,其中CD44+CD24-/low表型细胞比例分别2.07%和0.20%。 结论: 1.MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,对TA化疗药物比MCF-7细胞系敏感; 2.TA药物干预后,MCF-7细胞系表现为先抑制后较快恢复生长速度,间接反映MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新,适应新的微环境; 3.无血清培养液培养MCF-7细胞系见悬浮细胞球形成,说明其中部分细胞能形成细胞克隆,具有肿瘤干细胞特性; 4.流式细胞仪检测,两种细胞系中虽CD44+CD24-/low表型细胞比例小,但符合目前关于肿瘤干细胞比例的相关文献报道:肿瘤组织中存在极少量充当着干细胞角色的瘤细胞; 5. CD44+CD24-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志,尚待动物成瘤实验的进一步考证。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R737.905

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