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《福建医科大学》 2010年
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Th17/Treg失衡在EAE小鼠模型免疫学发病机制中的作用

侯娟  
【摘要】: 目的:建立慢性-非缓解性EAE小鼠模型,运用RT-PCR、ELISA、Western blot等方法在基因及蛋白水平检测IL-17、IL-6、Foxp3、在小鼠脑及脾组织中的动态表达变化,以探讨Th17/CD4+CD25+Treg失衡在慢性EAE小鼠模型免疫学发病机制中的作用。 方法:42只近交系清洁级8-10周健康雌性C57BL/6小鼠,随机分为佐剂对照组(n=18只)、EAE组(n=24只);各组小鼠又分为发病初、发病高峰和慢性期组。EAE组用人工合成的MOG35-55和完全弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠,佐剂对照组用等量的PBS代替MOG35-55,按Bensen[1]评分标准进行临床症状评分,运用实时荧光定量RT-PCR、ELISA、流式细胞术及Western blot技术检测各组各期小鼠IL-17、IL-6、IL-4及CD4+CD25+Treg细胞功能相关标记Foxp3的表达变化。 结果: 1.小鼠模型模型组小鼠发病率达75%(18/24),最高临床评分可达5分;佐剂对照组发病率及临床评分均为0。 2.实时荧光定量RT-PCR结果显示EAE组小鼠脑组织IL-6mRNA及IL-17mRNA的△CT值较佐剂对照组显著降低(P0.05),高峰期最明显,而Foxp3 mRNA初期及高峰期△CT值较对照组显著升高(P0.05),慢性期较对照组无显著差异(P0.05)。 3. ELISA结果表明佐剂对照组小鼠外周血IL-17含量各期之间无统计学差异(P0.05),EAE组较对照组显著升高,高峰期最明显(P0.05)。IL-4含量各期之间无统计学差异(P0.05),EAE组较对照组显著降低,高峰期最明显(P0.05)。 4. Western blot结果示EAE组初期及高峰期Foxp3蛋白灰度值较对照组明显降低(P0.05),慢性期有所上升(P0.05); 5.流式细胞术检测各组脾淋巴细胞CD4+CD25+Treg/CD4+的比例差异无统计学意义(P0.05)。Treg的免疫抑制功能单位在EAE组慢性期较其他各组显著升高(P0.05)。 结论: 1.慢性EAE中IL-17mRNA及蛋白水平的表达与疾病的严重程度正相关。 2. CD4+CD25+Treg细胞的功能相关单位Foxp3在EAE发病初期及高峰期受抑制,并在疾病慢性期反应性上调,使症状趋于缓解。 3. Th17/Treg平衡在疾病各期的变化在EAE病程中起到关键性作用, IL-6在EAE发病初期及高峰期加重Th17/Treg失衡,而在慢性期却起到相反的作用。 4. Western blot结果示EAE组初期及高峰期Foxp3蛋白灰度值较对照组明显降
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R744.51

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