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《福建中医药大学》 2011年
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骨痹舒片对膝骨关节炎组织形态、氧自由基及Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13影响的研究

秦梦  
【摘要】:目的:1.观察骨痹舒片对实验性膝骨关节炎组织形态的影响及对氧自由基的调节;2.观察骨痹舒片含药血清对兔关节软骨细胞的增殖及IL-1β作用下体外培养的兔关节软骨细胞Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13mRNA及蛋白表达的影响;3.从组织、细胞、蛋白、基因多水平探讨骨痹舒片防治OA的作用机制。 方法:1.SD大鼠40只,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为空白组、模型组、骨痹舒片组、抗骨增生胶囊组,每组10只。每日灌胃1次,连续6周。6周后取股骨内髁关节软骨,经HE、Masson、Safranin-0染色,光镜观察并行Mankin's评分;测血清SOD、MDA、NO含量;2.获取1月龄兔关节软骨细胞,随机分为空白组(正常兔血清)及骨痹舒片含药血清组,每组再分5%、10%、15%、20%4个浓度,共8组。分别于培养第Id、3d、5d、7d、9d用MTT法检测软骨细胞的增殖情况;3.获取1月龄兔关节软骨细胞,取第Ⅰ代细胞用于实验。实验分为空白组,模型组、骨痹舒片组、抗骨增生胶囊组4组,培养第4天时,模型组、骨痹舒片组及抗骨增生胶囊组分别加入IL-1β10ng/ml继续培养,分别在培养后24h、48h、72h用RT-PCR检测各指标mRNA表达情况;4.获取1月龄兔关节软骨细胞,取第Ⅰ代细胞用于实验。实验分为空白组,模型组、骨痹舒片组、抗骨增生胶囊组4组,培养第4天时,模型组、骨痹舒片组及抗骨增生胶囊组分别加入IL-1β10ng/ml继续培养,分别在培养后24h、48h、72h用In-Cell Western法检测各蛋白表达情况。 结果:1.Mankin's评分:模型组10.13±2.357,骨痹舒片组6.75±1.753,组间差异有统计学意义(p0.05);血清SOD、MDA、NO含量模型组分别为:21.315±8.633,12.619±1.5l,70.125±3.786:骨痹舒片组为:50.761±7.428,6.853±5.053,54.171±4.125,组间差异有统计学意义(P0.05);2.骨痹舒片含药血清组细胞呈血清浓度依赖性增殖。同一时间点各组间比较差异均有显著性(P0.05),以20%组最佳;空白血清组中5%组、10%组与20%组相比在各时间点相比均有显著性差异(P0.05),15%组与20%组相比在第1、3、5、7d各时间点相比无统计学差异(P0.05),在第9d时有统计学差异(P0.05),以20%组最佳。20%骨痹舒片含药血清组与20%空白血清组相比,在第Id、3d、5d、7d时有显著性差异(P0.05),第9d差异无统计学意义(P0.05);3.各时间点空白组与模型组Coll-Ⅱ、MMP-1及MMP-13表达差异均有显著性(P0.05),骨痹舒片组较模型组Coll-Ⅱ表达在48h、72h时间点有显著性差异(P0.05),骨痹舒片组较模型组MMP-1及MMP-13表达在各时间点均有显著性差异(P0.05);4.与模型组比,骨痹舒片组Coll-ⅡmRNA表达在各时间点均显著上调,MMP-1、MMP-13 mRNA表达在各时间点均显著下调。 结论:1.骨痹舒片可通过提高SOD活性、有效清除氧自由基,抑制NO的过量释放及生物学效应,发挥减轻软骨破坏,延缓关节软骨退变的作用;2.20%的骨痹舒片含药血清能显著促进软骨细胞的增殖,并将细胞的对数生长提前至第3d;3.骨痹舒片能上调IL-1β作用下Coll-ⅡmRNA的表达,下调IL-1β诱导和激活的MMP-1、MMP-13 mRNA的表达:4.骨痹舒片能有效抑制IL-1β对Coll-Ⅱ的降解和破坏作用,能抑制IL-1β对MMP-1、MMP-13的诱导和激活作用。
【学位授予单位】:福建中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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