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《福建师范大学》 2006年
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效应物对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

洪燕飞  
【摘要】:鲍鱼是我国南方海珍品的主要养殖种类,具有较高的经济价值和药用价值。碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,简称ALPase,EC 3.1.3.1)是鲍鱼重要的代谢酶之一,与鲍鱼的生长发育密切相关。本文主要研究磷酸盐(Na_2HPO_4)及其类似物(.Na_2HAsO_4和Na_3WO_4),二巯基苏糖醇(DTT)与巯基乙醇(ME)两种巯基化合物,甲酰胺、丙烯酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亚砜(DMSO)、二氧六环等有机溶剂,过氧钒配合物等多种环境污染物对酶活力的影响及抑制动力学,探讨碱性磷酸酶与鲍鱼生长及发病的关系,为人工养殖鲍鱼提供一些有益的参考信息。 研究效应物对酶的作用结果表明: 1.酶在二甲基甲酰胺、二甲亚砜(DMSO)、二氧六环等有机溶剂,磷酸盐及其类似物,巯基化合物(DTT/ME),过氧钒配合物溶液中,均有不同程度的失活作用,而且为可逆的反应。分别检测它们对该酶的失活作用机理,得知磷酸盐及其类似物、过氧钒配合物中的联吡啶过氧钒酸钠[PV(bipy)]与邻二氮杂菲过氧钒酸钾[PV(phen)]对鲍鱼ALPase的失活作用是竞争性抑制,巯基化合物(DTT和ME)、二氧六环的是非竞争性抑制,二甲基甲酰胺、二甲亚砜和过氧钒配合物中的过氧钒酸钾[PV(ox)]的是混合型抑制。 2.采用邹氏方法分别研究巯基化合物(DTT/ME)等对酶的抑制作用动力学,建立动力学模型,测定抑制剂与游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)结合的微观速度常数,并加于比较,证明底物对酶的抑制作用有明显的保护作用。 3.应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALPase经二甲亚砜微扰后的分子构象变化,说明二甲亚砜对酶构象有显著的影响。 4.以SDS为变性剂,研究对鲍鱼ALPase活力的影响,发现该酶活性中心对SDS变性剂并不敏感,说明鲍鱼ALPase对SDS具有高度的耐受性。 5.研究酶的热稳定性,结果表明酶在50℃以下较为稳定,55℃以上开始热变性。在65℃处理30 min后,酶活性完全丧失。分析酶的热失活动力学,测定热失活速度常数。游离酶的热失活速度常数(k_(+0))明显大于酶-底物络合物的失活速度常数(k_(+0)'),说明底物与酶的结合对酶的热失活作用有一定的保护作用。
【学位授予单位】:福建师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:X174;S917.4

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