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《福建师范大学》 2006年
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β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其表达

潘海芳  
【摘要】:白藜芦醇以游离态和糖苷结合态两种形式存在,是一种重要的植物抗毒素,主要存在于虎杖、葡萄等植物中。β-葡萄糖苷酶不仅能够水解白藜芦醇苷为白藜芦醇,还能够作用于细胞壁碎片或其它细胞组成,从而生成更多的白藜芦醇。本实验实现了木醋杆菌β-葡萄糖苷酶基因的原核表达,目的是为了生产粗酶制剂,用于提高从植物中提取白藜芦醇的得率;分别在DNA和cDNA水平从黑曲霉中克隆β-葡萄糖苷酶基因,为下一步在酿酒酵母中实现分泌表达以提高葡萄酒的白藜芦醇含量的研究奠定基础。 本实验通过降落PCR得到β-葡萄糖苷酶基因,然后将目的基因亚克隆到原核表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15。测序表明,表达载体构建成功。用IPTG诱导表达,目的蛋白表达量达到菌体总蛋白的23.8%,但表达的蛋白主要以包涵体形式存在。 本实验利用种属相似性设计了一对引物。先后以黑曲霉基因组DNA、mRNA为模板,利用PCR与RT-PCR技术得到β-葡萄糖苷酶基因的DNA序列和cDNA序列,将目的基因分别克隆在pMD18—T和pMD19—T上。测序表明,克隆得到的DNA序列全长2924bp,cDNA序列全长2583bp,编码860个氨基酸。与Genbank中已登录的黑曲霉β-葡萄糖苷酶的氨基酸序列比较,相似性达97%-99%。
【学位授予单位】:福建师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q943.2

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 韩笑;黑曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆与表达研究[D];中南林业科技大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李远华;β-葡萄糖苷酶的研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2002年04期
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10 李平,宛晓春,陶文沂,丁霄霖;黑曲霉生产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究产[J];应用生态学报;1999年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈秀霞;虎杖白藜芦醇、白藜芦醇苷和花生白藜芦醇含量的研究[D];福建师范大学;2004年
【共引文献】
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6 陈玉玺;张利平;吕志堂;;10株镰刀菌rDNA内转录间隔区(ITS)序列分析[J];安徽农业科学;2008年12期
7 王福慧;郭荣启;伊莉佳;郭琳;聂利珍;王瑞刚;;枯草芽孢杆菌纤溶酶植物根系分泌表达生物反应器模型的建立[J];安徽农业科学;2008年13期
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9 张宝俊;李志岗;张家榕;王建明;;4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究[J];安徽农业科学;2008年31期
10 李玉晖;朱清华;杨丽;;一株氮磷营养素降解菌的筛选和鉴定[J];安徽农业科学;2009年16期
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1 余兴;高丽萍;夏涛;;葡萄果实生长发育期间白藜芦醇及相关合成酶研究[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
2 车建美;肖荣凤;蓝江林;朱育菁;刘波;;尖孢镰刀菌β-D-葡萄糖苷酶产酶条件的初步研究[A];2008年福建省科协第八届学术年会农业分会场论文集[C];2008年
3 任慧慧;张喜逢;张妍;刘晓辉;李健;;~7Long R3 IGF-I的克隆表达[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
4 易松强;郑火青;张翠平;魏文挺;胡福良;;蜂蜜中β-葡萄糖苷酶活性测定及来源的研究[A];“蜂之巢”2010年全国蜂产品市场信息交流会暨中国(武汉)蜂业博览会论文集[C];2010年
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6 向海艳;戴开金;罗奇志;;酶法提取虎杖中白藜芦醇的研究[A];中国化学会第十四届有机分析及生物分析学术研讨会会议论文摘要集[C];2007年
7 冯晓博;凌波;吴颜祖;姚志荣;;外用两性霉素B脂质体治愈镰刀菌所致角膜炎一例[A];第二届全国深部真菌感染学术会议论文集[C];2007年
8 张建峰;张皎;姚静;侯加法;;鸡类胰岛素生长因子Ⅰ的克隆、表达及其表达产物的生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
9 喻华英;王景林;高丰;康琳;吴东林;赵金红;;志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
10 孟雪莲;杨静玉;吴春福;;白藜芦醇的药理学作用研究进展[A];两岸三地药理学与临床药理学术会议论文集[C];2008年
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6 张宗勤;欧洲葡萄‘无核白’10个营养系的性状研究[D];西北农林科技大学;2011年
7 李兴华;纤维素酶产生菌的筛选及纤维素酶基因在家蚕中的表达研究[D];浙江大学;2011年
8 高永贵;溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究[D];浙江大学;2002年
9 李景明;葡萄采后白藜芦醇的诱导与酿造工艺对葡萄酒中白藜芦醇的影响[D];中国农业大学;2003年
10 王霞;uPA的ATF与PAI-2CD双功能融合蛋白的研制及其抗肿瘤侵袭转移作用的研究[D];复旦大学;2003年
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1 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 孟庆娜;H5亚型禽流感病毒抗体快速检测试纸条的研制[D];华中农业大学;2010年
3 陈水莲;深海细菌Exiguobacterium Oxidotolerans A011 β-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达与酶学分析[D];华中农业大学;2010年
4 贾美玲;浆果类水果生物活性成分分析[D];辽宁师范大学;2010年
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6 李永华;紫外诱变纤维素分解菌降解木薯渣的研究[D];河南工业大学;2010年
7 廖德芳;耐热β-葡萄糖苷酶细菌的筛选、基因的克隆与表达[D];江南大学;2010年
8 杨杰;TRAIL与LDM联用和作用机制及TRAIL蛋白的表达[D];北京协和医学院;2010年
9 韩笑;黑曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆与表达研究[D];中南林业科技大学;2008年
10 姜瑞清;花生根中白藜芦醇的分离纯化工艺研究[D];中南林业科技大学;2008年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李远华;β-葡萄糖苷酶的研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2002年04期
2 宛晓春,汤坚,丁霄霖;β-葡萄糖苷酶产酶菌种的选育[J];安徽农业大学学报;1997年01期
3 李平,宛晓春,丁霄霖,陶文沂;黑曲霉β-葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质[J];安徽农业大学学报;1998年03期
4 宋丽雅,于群,卜凤荣;几种主要的酵母表达系统研究进展[J];中国输血杂志;2003年03期
5 李英波,吴国林;β-葡萄糖苷酶及酶固定化研究进展[J];茶业通报;2004年01期
6 张彬彬,李杰,柏锡,丁晓东,朱延明;里氏木霉β-葡萄糖苷酶基因的克隆及序列分析[J];东北农业大学学报;2004年02期
7 王志江;魏红福;;β-葡萄糖苷酶的研究[J];饲料工业;2006年22期
8 杨国良,李丽娜,陆师义,艾福彪,杨秀琴;真菌纤维二糖水解酶基因的克隆与表达研究[J];河北大学学报(自然科学版);1995年04期
9 陈燕勤,毛培宏,金湘,曾宪贤;纤维素酶及其分子生物学研究[J];化学与生物工程;2004年02期
10 马礼金,姚汝华,黄自然;外源基因在酵母中表达[J];华南农业大学学报;1997年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 马孟根;黑曲霉N25植酸酶phyA基因表达片段的克隆及pPIC9K重组酵母表达载体的构建[D];四川农业大学;2001年
2 赵述淼;烟熏曲霉植酸酶基因phyA的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];华中农业大学;2004年
3 李兵;内切纤维素酶EGⅢ在毕赤氏酵母中的表达及其吸附催化动力学研究[D];山东大学;2005年
4 陈小兵;里氏木霉RUT-C30甘露聚糖酶基因man1在毕赤酵母中的高效表达[D];中国农业科学院;2006年
【二级引证文献】
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1 石彩蕊;黑曲霉诱变育种产β-葡萄糖苷酶研究[D];中南林业科技大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宛晓春,汤坚,丁霄霖;β-葡萄糖苷酶产酶菌种的选育[J];安徽农业大学学报;1997年01期
2 李平,宛晓春,丁霄霖,陶文沂;黑曲霉β-葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质[J];安徽农业大学学报;1998年03期
3 游小清,王华夫,杨亚军;茶叶中芳樟醇香叶醇及其配糖体的研究进展[J];中国茶叶;1994年06期
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8 游小清,王华夫;茶叶中萜烯醇配糖体的释放作用[J];茶叶科学;1994年01期
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10 骆耀平,董尚胜,童启庆,夏涛,屠幼英,须海荣;7个茶树品种新梢生育过程中β-葡萄糖苷酶活性变化[J];茶叶科学;1997年S1期
【相似文献】
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6 刘敬,龚炜;HCV核心抗原基因的克隆和表达[J];生物学杂志;1999年01期
7 牛亚梅,王旻 ,胡容,张玉彬;人白细胞介素-10的克隆和表达[J];药物生物技术;1999年01期
8 袁红玲,杨磊,黄瑾,潘泽民,顾永清,陈宣茂,应康,谢毅;类硫氧还蛋白hTRXLⅠcDNA的克隆和原核表达[J];复旦学报(自然科学版);2000年06期
9 何志勇,陈哲宇,王东宁,杨冠珍,张惟杰,吴祥甫;霍乱弧菌zot基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];生物工程学报;2000年05期
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1 滑世轩;岑东;吕建新;裴仁治;;NK4基因的克隆及在Raji细胞中的表达[A];第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议论文集[C];2008年
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3 武鸿;梅乐和;;嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及特点的研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
4 李念;胡国库;张义正;冯红;;黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)环氧化物水解酶的克隆及酶学性质分析[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
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7 王利;唐懿挺;;牦牛同种移植炎症因子AIF-1的克隆和表达分析[A];第四届中国畜牧科技论坛论文集[C];2009年
8 郑宇;马兴元;魏东芝;赵莉;宫衡;;克雷伯氏菌甘油脱氢酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
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1 ;空调竞争:莫克隆彩电[N];厂长经理日报;2001年
2 ;克隆联想PC[N];中国经营报;2002年
3 本报记者 赵伟;奇瑞:克隆年代的另类[N];中国质量报;2001年
4 鲁钟鸣;要创新不要克隆[N];新华每日电讯;2001年
5 记者 施慧;帝斯曼公布黑曲霉基因组DNA序列[N];中国化工报;2007年
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8 经济学家温铁军○本报记者杨晓平;无法克隆的现代化[N];中华工商时报;2002年
9 中国WTO TBT-SPS中心供稿;加拿大修改食品生产中使用菌黑曲霉和派生磷脂酶临时营销许可[N];中国国门时报;2009年
10 本报记者 侯朝晖;“克隆”人体 赚![N];厂长经理日报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 樊东;几种鳞翅目昆虫几丁质酶基因的克隆与表达研究[D];东北农业大学;2004年
2 王严;曲霉植酸酶基因的克隆及其表达研究[D];大连理工大学;2007年
3 李迅;草菇cDNA削减文库的构建及三种多聚糖降解酶基因的克隆与表达[D];江南大学;2005年
4 赵林果;β-葡萄糖苷酶的制备与回收利用及其基因的克隆表达[D];南京林业大学;2007年
5 张焱如;马生长激素(GH)基因序列、分子进化及其多态性的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
6 李敏;牛免疫球蛋白重链基因中JH,Eμ片段敲除的研究和JH,Cμ基因的分析[D];中国农业大学;2005年
7 邹克琴;苹果钙依赖蛋白激酶MdCPK1:分子克隆、表达、定位及被脱落酸的激活[D];中国农业大学;2005年
8 隋正红;龙须菜藻红蛋白基因的研究[D];中国海洋大学;2001年
9 郭润芳;疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2005年
10 杜晓惠;鸡多趾候选基因的SNPs及表达差异研究[D];四川农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 柯晓静;黑曲霉WP1植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2007年
2 潘海芳;β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其表达[D];福建师范大学;2006年
3 胡晓航;银狐生长激素基因克隆与基因表达研究[D];东北林业大学;2005年
4 郭焕成;产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究[D];吉林大学;2005年
5 刘茜;水稻蛋白激酶的克隆及体外表达[D];河北农业大学;2005年
6 汪雪峰;球形幽门螺杆菌vacA、cagA基因克隆及序列分析[D];安徽理工大学;2005年
7 张瑞华;禽流感病毒血凝素基因的克隆、表达及亚型诊断方法的研究[D];华中农业大学;2005年
8 邱重晏;酸性蛋白酶基因的克隆及表达[D];江南大学;2005年
9 孙树民;旋毛虫肌幼虫p53 kDa和p45 kDa抗原基因的克隆、表达及鉴定[D];吉林大学;2006年
10 李旺;耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及纤维素酶基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2007年
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