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《福建师范大学》 2007年
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扩展青霉碱性脂肪酶稳定性研究

李品周  
【摘要】: 酶一般都不稳定,易失活,霉菌脂肪酶稳定性显得更差。目前国内外改善酶的稳定性包括2个方面:1.改变酶分子周围环境条件来提高酶分子的稳定性。2.从分子水平改造酶分子结构。本文按第1种研究路线对扩展青霉产生的脂肪酶的稳定性的研究,结果总结如下: (1)发酵培养基以黄豆饼粉5%、玉米淀粉1.2%有利于保持酶的稳定性:K_2SO_40.03%、FeSO_40.03%、ZnSO_40%既有利于脂肪酶的合成,也有利于保持酶的稳定性;发酵培养基中添加透性剂对该菌生长、合成代谢均不利,因此也难以提高脂肪酶的稳定性。 (2)在20h内,能较稳定维持发酵液和过滤液中脂肪酶活性的最佳PH为8.5:菌丝体中脂肪酶活性的最佳PH为6.0;但随着温度升高和贮存的时间延长,酶稳定性越来越低。 (3)在扩展青霉(Penicillium cxpansum)FS1884生长、合成代谢过程中,蛋白酶的合成在20h左右达到高峰,而脂肪酶在20-40 h左右,因此对脂肪酶合成影响不大,但发酵后蛋白酶的量即使是少量,也会使脂肪酶部分水解失活。该蛋白酶受EDTA抑制,且EDTA对脂肪酶的活性有一定的促进作用。分离纯化后的蛋白酶,通过分析测量得分子量为52.5kda,为实际工作中选择相关分子筛提供参考数据。 (4)从粗酶中分离出来的淀粉和粗纤维按同等量再加入纯化后液体酶中,使酶稳定性有所下降;从粗酶中分离出来的总糖和金属离子(金属离子以金属化合物形式)按同等量再加入纯化后液体酶中,均对不影响脂肪酶稳定性。 (5)外加一定浓度的金属离子、糖、醇、盐到粗酶液中,分别放置在35℃、25℃、15℃下,于2、4、9d,取样进行残余酶活测定,结果为:KCl、Cacl_2、四硼酸钠、丁二酸钠、山梨糖、丙三醇均可提高粗酶热稳定性的半衰期,对以上因子进行正交试验结果:液体脂肪酶稳定剂的最佳组合配方为4mM的Ca~(2+)、0.0313M的四硼酸钠和4M的丙三醇,在40℃下可提高脂肪酶热稳定性半衰期84小时,35℃下提高酶半衰期为790 h。而固体脂肪酶稳定剂的最佳组合配方为2mM的Ca~(2+)、0.0313 M四硼酸钠和0.5%山梨糖,在40℃下可提高脂肪酶热稳定性半衰期30小时,35℃下提高酶半衰期为166 h。
【学位授予单位】:福建师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q814

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【参考文献】
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