高产环孢菌素A镰刀菌的育种及遗传特性研究

【摘要】： 本研究的目的在于选育高产环孢菌素的镰刀菌菌株,提高这种产生重要免疫抑制剂工业菌株的经济效益;研究低产和高产菌株遗传特性的差异,了解镰刀菌环孢菌素生物合成机制。 本文首先通过18S rDNA分子标记鉴定环孢菌素A产生菌421502的分类学位置,确定该菌株属于镰刀菌,与传统分类学鉴定结果一致。 利用蜗牛酶,优化酶解条件,获得高产量的原生质体,原生质体浓度为7×10~5个/ml。在高渗PDA培养基上原生质体获得再生。原生质体形成率和再生率分别为62.8%和29.6%。利用原生质体激光诱变获得高产菌株。 设计嵌套引物通过两轮PCR克隆出镰刀菌421502的丙氨酸消旋酶基因部分片段,证明与雪白白僵菌的丙氨酸消旋酶基因高度同源。