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《南昌大学》 2012年
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冷诱导RNA结合蛋白在心肌细胞凋亡中的保护作用

万莉  
【摘要】:目的: 研究表明32°C低温对脑损伤及心肌损伤有保护作用,临床上多用于心脏手术和治疗严重脑损伤。目前低温保护作用的机制还不清楚。冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是在32°C低温情况下表达显著增加的一种冷休克蛋白,其作用尚不明确。大量研究表明心肌细胞的异常凋亡在众多心脏疾病的发生发展中发挥着重要作用。本研究通过观察CIRP在心肌细胞凋亡中的作用,旨在探讨低温对心肌损伤的保护作用机制。 方法: 用H_2O_2处理H9c2心肌细胞,建立H_2O_2诱导H9c2心肌细胞凋亡模型。用电子控温细胞培养箱分别进行常温(37°C)和低温(32°C)干预。用stealth-RNAi进行干扰,下调CIRP表达。 收集上清检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR检测H9c2心肌细胞内CIRP mRNA表达变化;western blot检测H9c2心肌细胞CIRP蛋白表达变化。 结果: 常温下CIRP在H9c2心肌细胞中有表达。将接受H_2O_2处理的H9c2心肌细胞分别置于常温/低温培养箱培养,结果发现,常温H_2O_2组细胞存活率低于低温H_2O_2组和常温对照组;常温H_2O_2组的LDH活性、细胞凋亡率高于低温H_2O_2组和常温对照组,且从6h开始两处理组之间出现显著差异(p0.05);低温H_2O_2组中CIRP mRNA和蛋白表达水平高于常温H_2O_2组,且从6h开始出现显著差异(p0.05);对低温+H_2O_2组进行CIRP-iRNA处理后,CIRP蛋白表达量明显下降,细胞LDH及细胞凋亡率较低温H_2O_2组上升,与低温H_2O_2组差别显著(p0.05)。 结论: H_2O_2能诱导H9c2心肌细胞出现凋亡。低温可减轻H_2O_2所致的H9c2心肌细胞损伤,减少细胞凋亡。通过RNA干扰技术下调CIRP表达低温H_2O_2组细胞LDH及细胞凋亡率上升,推测CIRP可能对H9c2心肌细胞有保护作用。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R363

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