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《南昌大学》 2012年
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Notch信号通路在肺成纤维细胞表型转化中的作用及机制研究

于秀文  
【摘要】:目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号前后,在肺成纤维细胞中Notch信号通路受体Notch1、配体Jagged1及肌成纤维细胞标志因子α-SMA表达的变化,研究Notch信号通路在肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用。 方法:采用胰酶消化法,从新出生2-3天的S-D大鼠肺组织中分离培养肺成纤维细胞,波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学法鉴定培养至第三代的成纤维细胞的纯度,无血清培养基同步24h,再将细胞分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组;TGF-β1组及TGF-β1+DAPT组加入5ng/ml的TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,TGF-β1+DAPT组同时加入500nmol/l的DAPT抑制Notch信号的表达;分别采用免疫细胞化学法检测α-SMA蛋白的表达变化,RT-PCR法检测Notch1、Jagged1和α-SMA mRNA的表达变化,Western-blot法检测Notch1、Jagged1和α-SMA蛋白的表达变化;采用SPSS18.0统计软件进行统计学分析,两样本均数的比较采用t检验,多个样本均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果:(1)Vimentin免疫细胞化学:几乎100%细胞胞浆内可见棕褐色颗粒及条纹,证明胰酶消化法培养至第三代的几乎全为成纤维细胞;(2)α-SMA免疫细胞化学:未加药物干预的对照组细胞中少部分细胞内有淡黄色颗粒及条纹,TGF-β1组大部分细胞内有黄色和黄褐色颗粒及条纹,TGF-β1+DAPT组部分细胞内有淡黄色颗粒及条纹;(3)α-SMAmRNA和蛋白表达:TGF-β1组α-SMA的mRNA和蛋白的相对吸光度值(0.8510.027和0.7850.020)较对照组(0.3950.018和0.3910.022)和TGF-β1+DAPT组(0.3540.029和0.3970.016)显著升高,但对照组与TGF-β1+DAPT组比较则差异无统计学意义(P0.05);(4)Notch1mRNA和蛋白表达:TGF-β1组Notch1mRNA和蛋白相对吸光度值分别为0.783±0.018和0.701±0.026,较对照组(0.278±0.022和0.312±0.019)和TGF-β1+DAPT组(0.313±0.029和0.345±0.022)明显升高,而对照组和TGF-β1+DAPT组相比较则差异无统计学意义(P0.05);(5)Jagged1mRNA和蛋白表达:TGF-β1组Jagged1mRNA和蛋白相对吸光度值(0.851±0.028和0.847±0.026)较对照组(0.392±0.021和0.394±0.027)和TGF-β1+DAPT组(0.404±0.024和0.409±0.026)升高显著,对照组和TGF-β1+DAPT组相比较则差异无统计学意义(P0.05) 结论:TGF-β1可以诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,转化过程中Notch1、Jagged1和α-SMA mRNA及蛋白均表达升高,DAPT抑制Notch信号后,可以阻止肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,下调Notch1、Jagged1和α-SMAmRNA及蛋白的表达,进而抑制肺纤维化。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R363

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【参考文献】
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