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《南昌大学》 2014年
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IL-13对人肺腺癌A549细胞IL-13Rα2表达的影响

何晓燕  
【摘要】:目的: 本研究旨在探讨体人肺腺癌A549细胞IL-13Rα2表达情况以及IL-13对其表达的影响及对其三种表现型受体分布的影响,力图探索IL-13Rα2能否运用于肺腺癌靶向治疗的进一步研究。 方法: 1.细胞分组人肺腺癌A549生长在含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM高糖培养基中。细胞生长密度约75%时将细胞接于六孔板。分为空白组(饥饿24小时,不加IL-13刺激)和浓度组:10、20、50、100ng/ml(IL-13的刺激浓度)和时间组:12、24、48h(20ng/ml IL-13的刺激时间),各组细胞孔数为6孔。至细胞计数约106/ml或者融合度约80%左右时血清饥饿24h,各组加入IL-13。根据各组条件分别收集细胞上清液和总RNA。 2. IL-13Rα2总RNA定量与质量鉴定根据试剂盒提取总RNA样本。 3.qRT-PCR采用qRT-PCR技术检测IL-13Rα2mRNA的表达水平,每孔细胞所提取的mRNA逆转录重复3次。RT反应体系20μl,β-actin作为内参对照△Ct=(CtIL-13Rα2RNA-CtΒ-actinRNA),△△Ct=待测样品(CtIL-13Rα2RNA-CtΒ-actinRNA)-空白(CtmiRNA-CtU6RNA)。待测IL-13Rα2RNA的表达情况通过2-△△Ct法计算。 4.ELISA检测可溶性IL-13Rα2含量根据试剂盒使用说明孵育和显色,测450nm波长条件下吸光度值(每个组设3个复孔取平均值)。 5.流式细胞术检测胞膜型以及胞内型IL-13Rα2的表达细胞数计算公式:各实验组实际表达量百分比=各实验组表达量百分比-同型空白组表达量百分比。 结果: 1.qRT-PCR结果浓度组结果显示空白组未受IL-13刺激的情况下A549细胞高表达IL-13Rα2,实验组与空白组比较显示,10ng/ml IL-13显著下调IL-13Rα2mRNA的表达(P0.05),20ng/mL IL-13对总IL-13Rα2mRNA的表达的下调作用不显著(P0.05),随着IL-13刺激浓度的增加,A549细胞IL-13Rα2mRNA表达显著下调(P0.01)。实验组与空白组比较,IL-13刺激A549细胞24h,其对IL-13Rα2mRNA表达的影响不显著(P0.05),20ng/ml IL-13刺激A549细胞12h,48h,其IL-13Rα2mRNA的表达量显著下调(P0.05) 2.ELISA结果ELISA旨在观察IL-13对A549分泌型IL-13Rα2表达量的影响,统计学分析各实验组与空白组分泌型IL-13Rα2之间无统计学差异(p0.05)。说明在实验剂量的条件下IL-13对分泌型IL-13Rα2的表达无显著影响。 3.流式细胞术结果IL-1320ng/ml刺激A549细胞24h时表达胞膜型IL-13Rα2的细胞数最高,50ng/ml时表达胞内型IL-13Rα2的细胞数最高。同等浓度条件下,胞膜型IL-13Rα2的表达细胞数随着IL-13刺激时间的增加逐渐增加,而胞内型IL-13Rα2的表达细胞数随着Il-13刺激时间的增加逐渐减少。 结论:人肺腺癌A549细胞自身不需任何刺激即可高表达IL-13Rα2;分泌型IL-13Rα2的表达量受IL-13的影响不明显;IL-1320ng/ml时上调A549细胞胞膜型IL-13Rα2的表达。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R734.2

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