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《南昌大学》 2015年
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长双歧杆菌NCU712高密度培养及菌剂制备技术研究

杜曼  
【摘要】:双歧杆菌被普遍认为是人类胃肠道中益生菌群的重要组成部分,对人类肠道疾病的防治及微生态平衡的调节尤为重要。双歧杆菌在人体内的数量逐年减少,为保证其益生作用的全面发挥,双歧杆菌微生态制剂及其发酵食品的研究逐渐成为热点。双歧杆菌直投式发酵剂的研究工作主要解决了双歧杆菌在体外培养难以得到浓度高、活性好、可直接用于工业生产的难题,本文主要研究了双歧杆菌高密度培养技术及真空冷冻干燥菌粉的制备工艺。本文主要研究内容如下:1.长双歧杆菌NCU712(Bifidobacterium Longum NCU712,后文均简写为B.longum NCU712)最佳增殖培养基配方研究。根据双歧杆菌NCU712的生长特性,以MRSC培养基为基础,利用单因素实验确定葡萄糖、酵母提取粉、K2PHO4及低聚果糖为最佳成分并确定添加量。利用正交设计和均匀设计优化培养基组分和水平,通过对比两种优化结果,最终确定双歧杆菌NCU712最佳培养基的配方为:葡萄糖0.5%,酵母提取粉6.4%,K2HPO4 0.3%,MgSO4 0.02%,MnSO40.005%,吐温-80 0.1%,L-半胱氨酸0.05%,低聚果糖0.5%。利用增殖培养基培养双歧杆菌NCU712,发酵培养20h,活菌数达到1.39×109CFU/m L。2.B.longum NCU712培养条件及罐上发酵策略的确定。通过单因素实验确定罐上发酵接种量为10%,培养温度为37℃,以氨水调节pH,维持在pH 6.0。在最佳培养条件的基础上,根据双歧杆菌NCU712生长曲线的绘制结果,确定最佳收获时间为20h。采用高效液相色谱法研究培养过程中代谢产物变化,产生的有机酸组分主要为乳酸及乙酸。将化学中和法运用于发酵罐上培养,发酵终点菌体浓度为3.8×109CFU/mL。3.高活性B.longum NCU712菌粉研制关键技术研究。基于高密度培养技术的研究,以存活率为比较标准进行优化,确定保护剂最终配方为:谷氨酸钠5%,葡萄糖5%,甘油3%,海藻糖5%。高密度发酵菌液4500 rpm离心10min,加入保护剂,物料厚度6 mm装入平皿,真空冷冻干燥20h。真空冷冻干燥制备的菌剂中活菌含量可达到3.3×1011CFU/m L,存活率高达89.26%,4℃环境最适合B.longum NCU712冻干菌粉的贮藏,贮藏60d后,菌粉内活菌含量仍可达到1.07×1011CFU/m L。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R371;TQ920.1

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