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《南昌大学》 2018年
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急性心肌梗死患者血浆外泌体介导促炎免疫反应

龚志坚  
【摘要】:背景:越来越多的研究数据证实外泌体在炎症反应中扮演了重要角色。然而急性心梗患者血浆外泌体在炎症中的生物角色目前并未见相关报道。本研究假设急性心梗患者内源性血浆外泌体可介导促炎免疫反应。目的:本研究通过分离、鉴定急性心梗患者和健康成人的血浆外泌体,体外实验评估急性心梗患者血浆外泌体促炎效应,同时研究其可能涉及的分子机制。方法:分离提纯急性心梗(AMI)组和健康对照(HCs)组血浆外泌体,采用扫描电镜、蛋白免疫印迹法和外泌体定量实验检测外泌体直径、标志蛋白及浓度。两组血浆外泌体分别与正常条件培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共孵育24h。采用CCK-8实验和LDH毒性实验检测细胞活性和毒性变化以评估急性心梗外泌体对内皮细胞的损伤效应;采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA和蛋白水平的变化以评估急性心梗外泌体的促炎效应。此外,采用蛋白免疫印迹法和免疫荧光染色技术检测介导促炎因子分泌经典的NF-κB信号分子是否被激活。结果:(1)急性心梗患者血浆外泌体浓度较健康对照组明显升高;(2)分离提纯的血浆外泌体可被HUVECs摄取,进而发挥其生物学效应;(3)急性心梗血浆外泌体与正常条件培养的HUVECs共孵育,不仅使其细胞活性降低、LDH释放增加;还诱导HUVECs促炎表型生成,具体表现为促炎因子IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA和蛋白质水平的升高;(4)急性心梗血浆外泌体诱导HUVECs促炎表型的生成至少部分依赖于NF-κB信号分子的激活。结论:体外实验第一次证实急性心梗血浆外泌体具有一定的促炎作用,可诱导HUVECs促炎表型的生成,且该促炎效应至少部分依赖于NF-κB信号的激活。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R542.22

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