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《南昌大学》 2019年
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基于NTCP介导的生脉方主要效应组分间的相互作用与配伍机制研究

詹涛  
【摘要】:背景:生脉方,包括生脉散、生脉饮、生脉注射液等中药制剂,临床上广泛应用于慢性心脏病、冠状动脉粥样硬化性心脏病、病毒性心肌炎等疾病的治疗。课题组前期研究发现,OATP1B1/1B3介导了生脉方中主要效应组分麦冬皂苷D与人参皂苷Rb1/Rd的相互作用。牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)也是一种非常重要的肝脏摄取转运体,可介导许多内源性和外源性物质的跨膜转运,在药物的吸收、分布、排泄过程中发挥重要作用,近年来基于NTCP介导的药物-药物间相互作用也引起广大学者的高度关注。目的:采用稳定表达NTCP的HEK293T细胞模型,深入研究生脉方主要效应组分对NTCP转运功能的影响及其基于NTCP介导的相互作用及其配伍机制,为生脉方的临床安全合理应用进一步提供实验依据。方法:1.建立牛磺胆酸钠(TCNa)、人参皂苷Rb1、Rd、Rg1、Re、麦冬皂苷D、麦冬皂苷Dˊ、甲基麦冬二氢高异黄酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙在HEK293T细胞中的LC-MS检测方法。2.考察梯度摄取时间和药物浓度对TCNa在NTCP-HEK293T细胞中摄取的影响,探索TCNa在NTCP-HEK293T细胞中的最佳摄取条件。3.考察生脉方主要效应部位及效应成分对NTCP-HEK293T细胞中TCNa的转运影响,通过Graphpad Prisms计算其各自的IC_(50)值,并探索其影响机制。4.考察生脉方主要效应组分在NTCP-HEK293T细胞中的摄取情况及其摄取动力学,计算相应的动力学参数V_(max)和K_m值。5.考察生脉方中主要复杂组分间经NTCP介导的相互作用,探索其可能的配伍机制。结果:1.本实验建立的TCNa、人参皂苷Rb1、Rd、Rg1、Re、麦冬皂苷D、麦冬皂苷Dˊ、甲基麦冬二氢高异黄酮A、甲基麦冬二氢高异黄酮B、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲和五味子醇乙的LC-MS定量分析方法特异性、精密度和准确度均较好,符合相关要求。2.在NTCP-HEK293T细胞中,TCNa的酶动力学参数K_m与V_(max)分别为9.41±1.22μM和342.63±17.36 pmol/mg protein/min。3.生脉方主要效应部位人参总皂苷、麦冬总皂苷、麦冬总黄酮、五味子总木脂素对NTCP-HEK293T细胞中TCNa的摄取有明显的抑制作用,在50μM其抑制率分别为44%、29%、49%和43%;12种主要效应成分中仅有人参皂苷Rg1、麦冬皂苷Dˊ和五味子甲素对TCNa的摄取有明显的抑制作用,在100μM其抑制率分别为58%、73%和69%。其中麦冬皂苷Dˊ对NTCP抑制作用较强,其IC_(50)值为6.71±0.70μM,而人参皂苷Rg1和五味子甲素抑制效果相对较弱,IC_(50)值分别为50.49±4.24μM和45.80±3.10μM。人参皂苷Rg1和麦冬皂苷Dˊ可能是通过非竞争性抑制模式来抑制TCNa的摄取,其V_(max)值分别从357.90±19.68pmol/mg protein/min减少至267.13±16.78 pmol/mg protein/min及从357.90±19.68 pmol/mg protein/min减少至212.13±13.77 pmol/mg protein/min,而K_m值几乎不变。五味子甲素则可能通过混合型抑制模式来抑制TCNa的摄取,其K_m值从10.09±1.46μM增加至15.52±2.31μM而V_(max)值从357.90±19.68pmol/mg protein/min减少至308.86±21.89 pmol/mg protein/min。4.生脉方12种主要效应成分中仅有人参皂苷Re和五味子乙素可能是NTCP的底物,可以经NTCP摄取转运,其摄取动力学参数K_m(μM)分别为47.13±2.73和82.43±11.36,V_(max)(pmol/mg protein/min)分别18.61±1.49和32.62±2.65;且它们在NTCP-HEK293T细胞中的摄取可以被经典抑制剂环孢菌素A明显抑制。5.麦冬总皂苷、麦冬总黄酮、五味子总木脂素、人参皂苷Rg1、麦冬皂苷Dˊ和五味子甲素对人参皂苷Re在NTCP-HEK293T细胞中的摄取有明显的抑制作用,在50μM抑制率分别为78%、95%、96%、36%、58%和49%。人参总皂苷、麦冬总皂苷、麦冬总黄酮和麦冬皂苷Dˊ对五味子乙素在NTCP-HEK293T细胞中的摄取有明显的抑制作用,在50μM抑制率分别为42%、41%、43%和39%,而人参皂苷Rg1和五味子甲素则对五味子乙素在NTCP-HEK293T细胞中的摄取无影响。结论:1.生脉方中主要效应部位人参总皂苷、麦冬总皂苷、麦冬总黄酮、五味子总木脂素及其主要效应成分人参皂苷Rg1、麦冬皂苷Dˊ、五味子甲素可不同程度地抑制NTCP介导的TCNa的摄取,是NTCP潜在的抑制剂,可能与临床药物发生基于NTCP介导的相互作用。2.人参皂苷Re和五味子乙素是NTCP潜在的底物,它们经NTCP介导的转运可被经典抑制剂环孢菌素A所抑制。3.生脉方中麦冬总皂苷、麦冬总黄酮、五味子总木脂素、人参皂苷Rg1、麦冬皂苷Dˊ和五味子甲素对NTCP介导的人参皂苷Re的摄取有不同程度的抑制作用;人参总皂苷、麦冬总皂苷、麦冬总黄酮和麦冬皂苷Dˊ对NTCP介导的五味子乙素的摄取有不同程度的抑制作用;生脉方主要复杂组分间存在基于NTCP介导的相互作用及配伍机制。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R289.5

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【参考文献】
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