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《南昌大学》 2019年
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CARD9介导NF-κB信号通路在缺血性脑损伤中的作用

丁建文  
【摘要】:目的:建立小鼠缺血性脑损伤模型,观察缺血性脑损伤后胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)与核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、炎症因子(TNF-ɑ、IL-lβ、IL-6)表达的时向变化关系。另一方面探讨siRNA沉默CARD9表达对缺血性脑损伤、NF-κB及炎症因子表达的影响,从而验证其作用机制。方法:采用线栓栓塞法构建小鼠缺血性脑损伤模型,根据收集术后脑组织的时间不同将实验组别共分为4组,依次为假手术组(A组)、缺血3h组(B组)、缺血6h组(C组)、缺血12h组(D组)。缺血组小鼠于术后3h、6h和12h预定时间点取患侧大脑组织,分别采用Western blot和RT-PCR检测CARD9、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白表达和炎症因子TNF-ɑ、IL-lβ、IL-6 mRNA的表达情况;下一步继续分组建模,分为假手术组、缺血12h组和siCARD9组,通过siRNA技术反向验证CARD9对神经症状评分及脑水肿程度、NF-κB信号通路及炎症因子TNF-ɑ、IL-lβ和IL-6的调控作用。结果:WB结果表明CARD9与NF-κB的表达随缺血时间的延长而增高,且缺血组与假手术组间差异均具有统计学意义(P0.05),提示CARD9与NF-κB表达与缺血性脑损伤有关;并且,RT-PCR结果显示,缺血组中炎症因子TNF-ɑ、IL-lβ和IL-6 mRNA表达随时间持续升高,与假手术组相比均有显著统计学意义(P0.01);相关性分析显示CARD9表达与NF-κB活化水平、炎症因子TNF-ɑ、IL-lβ和IL-6 mRNA表达呈正相关。用CARD9 siRNA预处理后,siCARD9组较缺血12h组,CARD9 mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);神经症状评分和脑组织水含量均降低,差异有统计学意义(P0.05);同时CARD9、NF-κB蛋白表达水平及炎症因子TNF-ɑ、IL-lβ和IL-6 mRNA表达水平降低(P0.05)。结论:CARD9可能通过介导NF-κB信号通路调节炎症反应,促使缺血性脑损伤形成。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R743.3

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