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《江西医学院》 2001年
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端粒酶活性检测及p53基因变异分析对恶性胸/腹水的诊断价值

刘东林  
【摘要】: 目的:端粒酶活化是细胞永生化的基础,90%左右的恶性肿瘤细胞均表达 端粒酶,测定端粒酶活性很可能是一种有价值的恶性肿瘤诊断新方法。p53基 因是重要的抑癌基因,其变异失活与肿瘤的发生发展关系密切。本研究通过检 测胸/腹水脱落细胞端粒酶活性,并对恶性胸/腹水上清中p53基因变异进行分 析,探讨它们对恶性胸/腹水的诊断价值,以期为良恶性胸/腹水的鉴别诊断提供 有价值的分子生物学指标。 方法:收集40例诊断明确的新鲜胸/腹水标本,包括恶性胸水8例(肺癌6 例、原发癌灶不明的恶性胸水2例),恶性腹水15例(原发性肝癌3例、卵巢 癌6例、胃癌3例、原发癌灶不明的恶性腹水3例),良性胸水9例(结核性胸 膜炎8例、心衰1例),良性腹水8例(肝硬化6例、胰腺炎2例)。胸/腹水离 心后,上清用作p53基因变异分析,细胞团用作端粒酶活性检测。血性胸/腹水 加蒸馏水低渗破坏红细胞。采用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测端粒酶活性, 扩增产物经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色显示结果。呈现间隔6bp的 梯状条带为端粒酶阳性。阳性对照为肝癌细胞系SMMC-7721,阳性对照细胞提 取液经65℃ 10min处理作为阴性对照。胸/腹水上清基因组DNA的抽提采用常 规蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法。同时提取胎盘组织DNA为正常对照。采用 PCR技术扩增p53基因第5~8外显子,以银染色单链构象多态性(SSCP)技术 分析PCR产物的基因变异,出现与正常对照不同的单链DNA条带或缺失者为 阳性。同时收集病例的胸/腹水脱落细胞学检查结果及血清肿瘤标志物(AFP、 CEA和SF)检测结果。 结果:23例恶性胸/腹水中21例端粒酶活性检测阳性,阳性率91.3%,其 中9例细胞学检查阴性者端粒酶检测均为阳性;17例良性胸/腹水中仅2例端粒 酶活性检测阳性,阳性率11.8%。恶性胸/腹水端粒酶检测阳性率明显高于良性 胸/腹水(P<0.001),也高于细胞学检查阳性率(60.9%)(P<0.05)。端粒酶活性 测定诊断恶性胸/腹水的敏感性为91.3%、特异性为88二%、阳性预测值为gi.3%。 阴性预测值为88.2%、诊断符合率为90.0%,明显优于血清肿瘤标志物 (AFP儿EA/A/SF)检测结果o功.05必.01人从 17例恶性胸/腹水的微量上清中, 能提取到足够的基因组DNA进行PCR反应,p53基因第54外显子均扩增成 功,银染色SSCP分析显示8例阳性(缺失3例,异常条带5例),阳性率为47.l%, 变异部位主要见于第5、7外显子。6例细胞学检查为阴性者有4例检测到p53 基因变异:2例端粒酶检测为阴性者有1例也检测到…3基因变异。 结论: 1.绝大多数恶性胸腹水端粒酶活性检测为阳性,而绝大多数良性胸/腹水 为阴性,提示恶性胸/腹水脱落细胞中存在端粒酶活性。 2.脱落细胞端粒酶活性检测对恶性胸/腹水的诊断具有良好的敏感性与特 异性,可作为临床良性与恶性胸/腹水鉴别诊断的指标之一。 3.恶性胸/腹水标本离心后取微量上清,采用常规酚/氯仿法即可提取足量 的DNA成功进行PCR反应。 4.银染色PCR毛SCP分析显示恶性胸/腹水上清p53基因第5必外显子存 在一定程度的变异,且主要发生在第5、7外显子。 5.以恶性胸/腹水上清为标本进行p53基因变异分析,对细胞学诊断可能 有补充作用,且在标本利用方面不影响细胞学检查。
【学位授予单位】:江西医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R730.4

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