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《江西医学院》 2004年
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单抗Au_(14-1)-脂质体-p53基因转染载体的制备及其在宫颈癌U_(14)细胞中的表达

薛同春  
【摘要】:p53基因是一种与人类许多肿瘤的发生发展都密切相关的肿瘤抑制基因,主要引起肿瘤细胞凋亡和细胞周期的抑制。利用基因转染技术将野生型p53cDNA转入肿瘤细胞可引起肿瘤细胞凋亡和生长抑制。以特异性的单克隆抗体为基因转染的载体,利用单克隆抗体的靶向定位作用进行肿瘤的基因治疗是基因转染技术的一个重要进展。本课题拟采用阳离子脂质体-单抗为载体,将带有人野生型p53cDNA的质粒DNA体外转染宫颈癌U14细胞,比较观察单抗-阳离子脂质体介导p53基因的转染及表达,为进一步探讨单抗-阳离子脂质体体内基因转染和宫颈癌的基因治疗提供实验依据。 本实验以修饰的碱裂解法从扩增的E Coli.大肠杆菌中提取纯化含wt-p53的质粒DNA,用辛酸-硫酸铵法纯化单抗Au14-1;以MBS为中介,与带有正电荷的多聚赖氨酸(PL)偶联,形成Au14-1与多聚赖氨酸的偶联复合物(Au14-1-PL),并将其与阳离子脂质体Lipofectin、质粒DNA混合,构成靶向基因转染载体。实验共分七组:空白对照组;DNA组;DNA+脂质体组;Au14-1+DNA+脂质体组;Au14-1+DNA组;M5+DNA+脂质体组; M5+DNA组(M5为Au14-1的对照单抗)。体外瞬时转染悬浮培养的宫颈癌U14细胞12h后加入含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养基继续培养48h,然后用间接细胞酶免疫化学法比较观察p53蛋白的表达。 实验发现: Au14-1-DNA -脂质体组、Au14-1-DNA组及DNA-脂质体组均可见特异的p53核蛋白染色;但Au14-1 -DNA-脂质体组和Au14-1-DNA组的p53核蛋白分布于整个胞核,而DNA-脂质体组p53核蛋白仅边集于核膜,其表达量较少。 WP=5 M5 -DNA -脂质体组、M5-DNA组、DNA组及空白对照组均无表达,整个细胞只见被苏木精染色的核膜。 本实验结果表明,由单抗Au14-1构成的靶向基因转染载体能够特异地介导p53基因的转移并在靶细胞中表达,且表达效果优于单纯阳离子脂质体载体介导的转染。
【学位授予单位】:江西医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R737.33

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 黄永红;野生型p53基因转染癌细胞增强免疫原性研究[D];南昌大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韩雨生,梁力建,黄洁夫,刘予川;p53转染对肝癌细胞系Hep3B的作用[J];癌症;1999年06期
2 关婷,崔满华,李守柔,金镇,邱晓红;野生型p53基因重组质粒的构建及对人卵巢癌细胞的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2002年01期
3 赖祥进,吴克,全家妩;人肺癌细胞转染野生型P~(53)基因对生长的影响[J];广西医科大学学报;2000年02期
4 吴克,赖祥进,刘会生,全家妩;非病毒载体法转染野生型P~(53)基因对肺癌细胞生长特性的影响[J];广西医科大学学报;2000年03期
5 温淦昇;邬淑云;;抗宫颈癌单克隆抗体的研究——1.杂交瘤形成和单克隆抗体产生[J];江西医学院学报;1985年Z1期
6 徐方云,蔡震宇,邬淑云,张青,王红梅,熊立跃,温淦升;99mTc-Au_(14-1)在荷人宫颈癌裸鼠体内的放射性分布与显像[J];江西医学院学报;2002年03期
7 穆红,刘丽,王玉亮,黄繁墙,刘蓉,彭林,刘明洲;脂质体介导的p53基因对肝癌细胞生长的抑制作用[J];免疫学杂志;2000年05期
8 陆敏,曹江,蔡心涵,鱼达,彭佳萍,郑树;转染外源p53基因在荷瘤裸鼠人肠癌细胞中表达的检测[J];实用肿瘤杂志;1996年04期
9 宋祖军,章翔;脂质体载体法将外源性野生型p53转染SHG_(44)细胞及验证[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年02期
10 王立夫 ,邬淑云 ,温淦昇;宫颈癌单克隆抗体-葡聚糖-氨甲喋呤偶合物的制备及其体外抗肿瘤作用[J];中国病理生理杂志;1992年04期
【共引文献】
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1 刘烈刚,刘恭平,姚平,郝丽萍,杨雪峰,孙秀发,朱清华;维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox-3.5 mRNA表达与胚胎发育关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年03期
2 安兰敏,杨军,徐兵;铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对P53基因表达影响的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
3 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
4 朱启星;马泰;涂登云;沈彤;丁锐;;银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞NO合成的影响[J];癌变.畸变.突变;2006年06期
5 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
6 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
7 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
8 刘家仁,庞永珣,张尤恩,范春,王贤珍,朱振岗;用细胞转化实验检测S江有机污染致癌危险性[J];癌变.畸变.突变;1999年04期
9 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
10 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
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1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 刘倩;韦庆益;刘丽萍;宁正祥;;富马酸单苯甲酯的合成及抗菌特性研究[A];广东省食品学会第六次会员大会暨学术研讨会论文集[C];2012年
4 张新妙;马润宇;;用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究[A];第二届全国膜分离技术在食品工业中应用研讨会论文集[C];2006年
5 高娟;唐明森;王艳玲;蒋再学;竺薇;罗满林;;重组猪α干扰素发酵工艺的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 刘俊;赵荣祥;丛品;洪钱江;;哺乳动物内耳再生毛细胞前体细胞来源的研究[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C];2009年
7 曹妍;杨钦滟;杜木英;阚健全;;山鸡椒油和八角精油抑菌作用的对比[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
8 邓利玲;胡小芳;卢明玥;钟耕;;冷榨南瓜子饼蛋白粉酶法水解工艺及其产物性质研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
9 冯婷;涂文伟;黄娟;李晋蓉;殷仲伟;范营营;李虹;;流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
10 李新民;党琦;;天佛参口服液(TFS)诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及机理探讨[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
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1 张冬梅;牙龈卟啉单胞菌侵入血管内皮细胞后粘附分子表达及信号调控的研究[D];中国医科大学;2008年
2 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
3 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
4 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 姚小磊;基于TGF-β1与Bcl-2的抗干眼症中药高通量筛选体系的建立[D];湖南中医药大学;2010年
6 彭莹;土星拟威尔酵母WC91-2菌株嗜杀因子和β-1,3-葡聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 刘伟;怀头鲇Silurus soldatovi早期发育生理生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
8 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
9 隋建新;单增李斯特菌鸡卵黄抗体的抑菌性能及其机理研究[D];中国海洋大学;2010年
10 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
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1 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年
2 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
3 张利芳;苦瓜多糖的纯化及其免疫和抗氧化活性作用[D];华中农业大学;2010年
4 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年
6 郑瑜;银杏核心种质构建初探[D];华中农业大学;2010年
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8 徐娟;T-2毒素多克隆抗体的制备及其化学发光免疫检测的初步研究[D];华中农业大学;2010年
9 王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年
10 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
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1 温淦昇;邬淑云;张纪宁;张建华;肖湘;;人宫颈癌的免疫组织化学分析[J];中国病理生理杂志;1988年05期
2 邬珊,邬淑云,温淦昇;正丁醇提取的低分子量宫颈癌细胞表面抗原[J];中国病理生理杂志;1993年01期
3 余鹰,邬淑云,温淦昇,刘秋如,徐方云,龚文华;DNA转染淋巴细胞表达宫颈癌细胞膜抗原[J];中国病理生理杂志;1999年12期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 肖炳燚;人源性单克隆抗体确定的卵巢癌抗原表位的分析[D];江西医学院;2001年
2 姚伟荣;宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的制备及其抑瘤效应观察[D];江西医学院;2003年
3 唐丽华;U_(14)-CBE脂质体瘤苗诱导的细胞和体液免疫应答[D];江西医学院;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄俊,王立明;前列腺癌基因治疗的研究现状[J];国外医学.泌尿系统分册;1997年05期
2 邬淑云,温淦升,徐方云,刘秋如,龚文华,余鹰,龙小雅,易为民,刘丝荪;人源性单克隆抗体识别的血清卵巢癌相关抗原[J];江西医学院学报;1998年01期
3 杨静平,孔玉英,林其谁;SA脂质体介导DNA转染细胞的进一步研究[J];生物化学与生物物理学报;1994年02期
4 吴克,全家妩;人类小细胞肺癌细胞转染野生型p53基因发生的凋亡[J];中国生物制品学杂志;1999年02期
5 孙性善;我国肿瘤放射免疫显像临床研究概况和展望[J];实用肿瘤杂志;1994年01期
6 李竹红,诸亚君,曹禄森,李学汤;野生型p53基因促进长春新碱诱导的细胞凋亡[J];药学学报;1997年08期
7 温淦昇;邬淑云;张纪宁;张建华;肖湘;;人宫颈癌的免疫组织化学分析[J];中国病理生理杂志;1988年05期
8 邬淑云,温淦升,张纪宁;单克隆抗体诱发肿瘤抗原调变的初步研究[J];中国病理生理杂志;1990年03期
9 温淦昇,邬淑云,张纪宁,黎曰真;单克隆抗体AU_(14-1)测定的抗原在人宫颈病变中的表达[J];中国病理生理杂志;1990年03期
10 王立夫 ,邬淑云 ,温淦昇;宫颈癌单克隆抗体-葡聚糖-氨甲喋呤偶合物的制备及其体外抗肿瘤作用[J];中国病理生理杂志;1992年04期
【相似文献】
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1 温淦昇,邬淑云,张纪宁,张建华,肖湘;宫颈癌的单克隆抗体免疫细胞化学分析[J];癌症;1986年03期
2 育巍;;脂质体与单克隆抗体结合增强抗病毒药效[J];国外医学情报;1990年24期
3 马如焕;;脂质体用于化疗[J];医学分子生物学杂志;1982年06期
4 邬淑云,温淦昇,张建华,张纪宁,黎曰真;单克隆抗体治疗小鼠宫颈癌[J];细胞与分子免疫学杂志;1988年03期
5 胡兰荣,温伟,郑昌学,吴健,董志伟;脂质体包裹阿霉素的体外抗肿瘤作用[J];中国生物化学与分子生物学报;1991年05期
6 徐方云,蔡震宇,邬淑云,张青,王红梅,熊立跃,温淦升;99mTc-Au_(14-1)在荷人宫颈癌裸鼠体内的放射性分布与显像[J];江西医学院学报;2002年03期
7 平其能;方晓玲;涂家生;;药物载体系统进展[J];药学进展;1988年02期
8 Rose P.G.;Blessing J.A.;Lele S.;Abulafia O.;吕涛;;宫颈鳞状细胞癌的二线化疗药盐酸多柔比星脂质体(Doxil)的疗效评效:妇科肿瘤组的Ⅱ期研究[J];世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册);2006年12期
9 武燕;;宫颈癌患者Th1/Th2细胞因子表达水平的研究[J];肿瘤研究与临床;2006年05期
10 胡志伟,邬淑云,温淦升;单克隆抗体AU_(14-1)测定人血清宫颈癌抗原[J];细胞与分子免疫学杂志;1995年01期
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1 赵连旭;唐劭年;刘振华;;靶向性脂质体P-MMA-DOSPER脑内特异转导pEGFP-C~2[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
2 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
3 徐敏;马伟斌;;单克隆抗体靶向给药系统[A];浙江省药剂学术会议论文集[C];2006年
4 程玉峰;魏玮;马道新;;Bcl-2与c-mycASODN联合转染对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用研究[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
5 王丹青;彭芝兰;尹如铁;牛晓宇;;HPV16 E7 siRNA表达载体对宫颈癌CaSKi细胞恶性表型的影响[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
6 方谨;王芸庆;宋今丹;;紫杉醇免疫脂质体的制备及其对人体大肠癌细胞的体外杀伤作用[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
7 吴敬波;杨红茹;何丽佳;吴天革;任培蓉;尚昌玲;向莉;张艳玲;张建文;;局部植入缓释氟尿嘧啶配合热放疗治疗宫颈癌临床初步研究[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
8 屠铮;崔恒;;卵巢移位手术在宫颈癌治疗中的应用[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
9 叶喜阳;马利国;谢梅青;;雌激素补充治疗对宫颈癌术后卵巢功能丧失者生存质量的影响[A];中华医学会第三次全国绝经学术会议暨绝经相关问题学习班论文汇编[C];2011年
10 施铮铮;朱华;张虎祥;万丽;胡燕;郑飞云;;凋亡抑制蛋白Livin在宫颈癌及癌前病变中的表达[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
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1 通讯员 李静 记者 马跃华;厦大研制国内首支宫颈癌疫苗[N];光明日报;2010年
2 记者 杜星星;昌吉市4万农牧区妇女接受免费宫颈癌检查[N];昌吉日报;2010年
3 本报记者 白轶南;宫颈癌 女性第二索命恶魔[N];保健时报;2004年
4 通讯员 温志勤;广州首位宫颈癌孕妇顺利产子[N];广东科技报;2004年
5 衣晓峰;当心宫颈癌偷袭[N];健康报;2003年
6 指导专家:安徽省中医院妇科主任、硕士研究生导师 李伟莉 见习记者 许红;女人花为何凋零红尘中[N];医药导报;2005年
7 记者 刘欢;世界首个癌症疫苗6月问世[N];北京日报;2006年
8 容小翔;无性乱的妇女为何患宫颈癌[N];卫生与生活报;2007年
9 何建昆;蔡有龄提出宫颈癌治疗新方案[N];科技日报;2009年
10 记者 姜凝;绝大部分宫颈癌可预防[N];天津日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
3 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
4 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
5 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
6 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年
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1 薛同春;单抗Au_(14-1)-脂质体-p53基因转染载体的制备及其在宫颈癌U_(14)细胞中的表达[D];江西医学院;2004年
2 姚伟荣;宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的制备及其抑瘤效应观察[D];江西医学院;2003年
3 唐丽华;U_(14)-CBE脂质体瘤苗诱导的细胞和体液免疫应答[D];江西医学院;2005年
4 王红梅;宫颈癌单克隆抗体AU14-1介导效应细胞对靶细胞的细胞毒[D];江西医学院;2001年
5 于君丽;钙离子和维生素D_3对宫颈癌细胞增殖的影响[D];中国医科大学;2002年
6 任昀;内皮抑素和血管内皮生长因子在宫颈癌组织中的表达及其生物学意义[D];郑州大学;2004年
7 綦惠娟;术前新辅助化疗在巨块型宫颈癌Ⅰ_(b2)-Ⅱ_b中的疗效观察[D];大连医科大学;2010年
8 朱晓亮;脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂的制备、质量控制及体外生物粘附性测定[D];第一军医大学;2004年
9 武燕;宫颈癌患者T_H1/T_H2细胞因子表达水平的研究[D];山西医科大学;2005年
10 李鹏;Trastuzumab F(ab')_2修饰紫杉醇免疫脂质体对结肠癌细胞的体外杀伤作用[D];第一军医大学;2007年
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