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《江西医学院》 2005年
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人类p73基因TAp73αcDNA片段扩增及鉴定

段红军  
【摘要】:目的:扩增及鉴定包含人类p73 基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA 片段,为下一阶段将此片段克隆入真核表达载体,转染肝癌细胞,观察其对肝癌细胞生物活性的影响做必要的前期准备。 方法:(1)用TrizolTM Reagent 从培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞株中提取总RNA,并检测其纯度、浓度。(2)根据NCBI GenBank(NM_005427)收录的TAp73αmRNA 序列,借助PRIMER PREMIER 5.0 软件设计5′末端带有限制性核酸内切酶HindIII 和XbaI 识别序列的引物一对。(3)采用RT-PCR方法获取TAp73αcDNA 目的片段。(4) 目的片段回收纯化后用限制性内切酶BglI 酶切及测序两种方法鉴定目的片段正确与否。 结果:⑴通过RT-PCR 方法利用自行设计的一对引物,扩增出一条长度为1934bp 的单一片段,与根据NCBI GenBank(NM_005427)收录TAp73αmRNA序列理论预计的cDNA 片段长度一致。⑵1934bp 目的片段回收纯化后经限制性内切酶BglI 酶切,1%琼脂糖凝胶电泳出现了预期的117bp,535bp,1282bp 三种片段。⑶目的片段部分序列的测序结果与NCBI GenBank(NM_005427)收录的TAp73αmRNA 序列一致。 结论:包含人类p73 基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA 片段被成功扩增且末端带有限制性核酸内切酶HindIII 和XbaI 识别序列,可用于下一阶段将此片段克隆入真核表达载体。
【学位授予单位】:江西医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

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