幽门螺杆菌耐药基因的DNA序列分析
【摘要】：背景和目的:幽门螺杆菌(Hp)是一种能长期定植于胃黏膜的致病菌,全球约50%的人口感染Hp。Hp 感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌以及MLAT淋巴瘤的发生密切相关,1994 年国际癌症研究机构已将其列为人类Ⅰ类致癌因子。国内外学者已形成共识——对Hp 感染需要进行根除治疗。根除Hp 方案中常用的抗生素有甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素和四环素等,但Hp 对这些抗生素相继产生高低不一的耐药率,已严重影响根除Hp 的治疗效果。Hp 的耐药性与耐药基因突变有密切关系,rdxA 与甲硝唑耐药有关,pbp1A 与阿莫西林耐药有关,23S rRNA 与克拉霉素耐药有关,16S rRNA 与四环素耐药有关。以往受技术限制,无法精确描述耐药基因中的DNA 序列变化情况,本研究采用DNA 测序技术研究耐药菌株与敏感菌株之间耐药基因的DNA 差异,探索基因突变在Hp 耐药产生过程中的作用。
方法:将胃镜活检标本,接种于含7%-10%羊血Skirrow 选择性培养基,37℃微需氧环境培养3-5 天,共分离262 株Hp,鉴定后,菌种-80℃保存。药敏试验采用纸片扩散法,对204 例Hp 临床分离菌株分别进行甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素和四环素药敏试验,筛选出各药物的耐药菌株和敏感菌株。从MTZ~R 菌株、MTZS 菌株和Hp11637 扩增rdxA 基因;从AMXR 菌株、AMXS菌株和Hp11637 扩增pbp1A 基因;从CLR~R菌株、CLR~S菌株和Hp11637 扩增23S rRNA 基因;从TET~R 菌株、TETS 菌株和Hp11637 扩增16SrRNA 基因。PCR 产物进行DNA 测序,测序结果采用DNAStar 和NCBI Blast 分析,探讨临床菌株和标准菌株的DNA 序列和氨基酸序列差异。
结果:①Hp 对抗生素耐药率分别为:甲硝唑50.0%(102/204);阿莫西林4.4%(9/204);克拉霉素8.8%(18/204);四环素4.4%(9/204)。②临床分离菌株与26695 比较rdxA 基因同源性,MTZ~R菌株为93.25%±1.93%;MTZ~S菌株93.79%±1.14%,P0.05,无统计学意义,临床分离菌株与26695 比较RdxA
【关键词】：幽门螺杆菌 耐药基因 rdxA pbp1A 23S rNA 16S rRNA 【学位授予单位】：江西医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R378
【目录】：
- 一、中文摘要4-6
- 二、英文摘要6-9
- 三、前言9-10
- 四、材料与方法10-18
- 五、结果18-30
- 六、讨论30-37
- 七、结论37
- 八、参考文献37-45
- 九、致谢45-46
- 十、附录46-52
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