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《山东大学》 2011年
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牛蒡寡糖脂质体的制备鉴定以及人α1,6岩藻糖基转移酶的初步研究

郜海涛  
【摘要】:第一部分的研究内容为牛蒡寡糖脂质体的制备和鉴定,主要分为牛蒡寡糖含量测定方法的建立、牛蒡寡糖脂质体制备工艺及处方研究以及牛蒡寡糖脂质体理化性质鉴定三个方面的内容。 实验目的:建立计算牛蒡寡糖脂质体的包封率的方法,优化制备牛蒡寡糖脂质体的配方,并对制备好的脂质体进行理化性质和稳定性的研究。 实验方法:建立葡萄糖浓度测定的标准曲线,通过计算葡萄糖和牛蒡寡糖之间的换算因子来达到对游离牛蒡寡糖的测定,从而实现牛蒡寡糖脂质体包封率的计算;继而选用药脂比、有机相和水相比例以及磷脂和胆固醇比为考察因素,以包封率为主要考察指标设计正交实验来优化制备处方,并另行考察高压均质条件的优化,以此来优化牛蒡寡糖脂质体的制备方案;再对制备好的牛蒡寡糖脂质体进行理化性质和稳定性研究,包括形态的观察、粒径的测定、zeta电势的测定、通过包封率的测定研究不同储存条件下的稳定性等。 实验结果:葡萄糖浓度测定的标准曲线为y=12.4051x+0.01428(R=0.99962),线性范围为0.005-0.15mg/ml。牛蒡寡糖溶液的换算因子f为1.28。通过截留分子量为30KD的超滤离心管可以对牛蒡寡糖和脂质体进行很好的分离。牛蒡寡糖脂质体制备最优方法为薄膜分散法;制备最优条件为:药脂比1:6,有机相和水相体积比1:2,卵磷脂和胆固醇质量比4:1;高压均质最优条件为:压力800bar,循环数3。制备好的牛蒡寡糖脂质为粒径均匀的球状或近球状小囊泡,平均粒径为74.2nm,多相分散系数为0.582,用微电泳仪测得其zeta电势为-12.56mv,通过测定在常温和4低温保存下渗透率的变化确定在4下保存具有较好的稳定性。但稳定性仍有待改善。 结论:实验中成功制备牛蒡寡糖脂质体,并对制备工艺、处方以及理化性质和稳定性作出了研究,该脂质体性质比较稳定,大小均匀,具有较高的包封率,可进行细胞学和动物活体实验,为其临床及后续应用奠定了基础。 第二部分的研究内容为可溶性的人α-1,6岩藻糖基转移酶(a-1,6 FucT,FUT8)以及对抗该酶的多克隆抗体的初步研究。 实验目的:运用三种不同的方法来表达可溶性的α-1,6岩藻糖基转移酶,以用于下游糖蛋白的合成,并为该酶催化和反应机制的研究提供底物支持。制备抗FUT8的多抗,为今后开发癌症的血清学诊断试剂打下基础。 实验方法:本论文首先从人胃癌细胞MKN45细胞株中扩增出FUT8的cDNA,构建pET28a-sFUT8载体,转化至大肠杆菌(E. coli)进行大量表达。之后对表达得到的包涵体蛋白进行纯化、变性和复性研究,以纯化后的包涵体为免疫抗原四次免疫小鼠,制备多克隆抗体,并测定其效价。鉴于原核表达无可溶性目的蛋白获得,实验中又尝试了巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)和体外试剂盒表达a-1,6岩藻糖基转移酶,实验将FUT8基因(FUT8)克隆到pPIC9k质粒上,电转化入Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得高拷贝的重组菌株,甲醇诱导表达FUT8。同时,我们将构建的pET28a-sFUT8载体利用试剂盒在体外进行转录和翻译,利用SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达情况。 实验结果:实验从MKN45细胞株中成功扩增得到FUT8的cDNA,并成功构建pET28a-sFUT8原核载体,原核表达获得FUT8的包涵体蛋白。我们利用纯化后的包涵体进行了多抗制备,得到效价在1:5000至1:10000之间的抗FUT8多抗,为癌症的血清学诊断试剂研究打下了基础。同时我们成功构建pPIC9k-FUT8真核表达载体,可溶性FUT8蛋白在毕赤酵母中成功表达。另外,pET28a-sFUT8载体在体外成功表达,得到了可溶性的FUT8蛋白,SDS-PAGE和Western Blot都验证蛋白成功表达。 结论:本实验室成功构建了pET28a-sFUT8原核载体和pPIC9k-FUT8真核载体,并将其分别转化至大肠杆菌和毕赤酵母内进行表达,得到的FUT8目的蛋白。原核表达得到包涵体蛋白,真核表达和试剂盒体外表达都得到少量的可溶性FUT8蛋白,表达得到的可溶性α-1,6岩藻糖基转移酶可用于下游糖蛋白的合成,并为该酶催化和反应机制的研究提供底物支持。另外,实验中对抗FUT8的多克隆抗体进行了初步研究,为今后开发鉴别癌症的血清学诊断试剂打下基础。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S631.9;Q946

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 董如何,肖必华,方永水;正交试验设计的理论分析方法及应用[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年06期
2 吕洛,魏少敏,林惠芬,刘玉亮,应康,毛裕民;脂质体载药系统经皮给药的研究进展[J];日用化学工业;2002年05期
3 郝林华,王晓滨,陈靠山,李光友;功能性寡糖的研究进展与应用[J];饲料工业;2005年12期
4 喻胜飞;;脂质体及其在化妆品中的应用[J];广东化工;2006年12期
5 郝林华,陈磊,仲娜,陈靠山,李光友;牛蒡寡糖的分离纯化及结构研究[J];高等学校化学学报;2005年07期
6 于宏;;牛蒡的化学成分与生物活性[J];国外医药(植物药分册);2007年06期
7 董文博;陈洪栋;郝建国;李红民;;用于药用蛋白生产的外源表达系统[J];基因组学与应用生物学;2009年04期
8 周文辉;菊糖及低果聚糖的代谢及生理特性[J];广州食品工业科技;2004年02期
9 柴龙龙;安佰平;宋玉琴;;眼部疾病用药制剂的研究概述[J];海峡药学;2010年05期
10 郝林华,陈靠山,李光友;牛蒡寡糖对双歧杆菌体外生长的促进作用[J];海洋科学进展;2005年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李平;;提高中药制剂稳定性方法的研究进展[J];中医药临床杂志;2012年04期
2 孙利军;吴少云;张亚莉;柳春燕;陈靠山;;牛蒡寡糖对草决明幼苗生长的影响[J];安徽农学通报;2007年19期
3 魏东;王连翠;;牛蒡根的研究进展[J];安徽农业科学;2006年15期
4 马原松;;寡糖及其开发利用[J];安徽农业科学;2006年16期
5 杨佳明;司龙亭;闫世江;马志国;;黄瓜耐低温相关指标的初步研究[J];安徽农业科学;2007年03期
6 梁永松;曹国璠;龚军;;玉米·平菇及绞股蓝高效间套复种技术研究[J];安徽农业科学;2007年25期
7 张磊;袁信华;徐一平;过世东;;不同粒度鱼粉的物理特性研究[J];安徽农业科学;2007年32期
8 葛德升,刘涟,庄卫红;盐酸环丙沙星软膏剂的含量测定及稳定性研究[J];安徽医药;2004年03期
9 宋群亮,张平;中药微球制剂研究进展[J];安徽医药;2005年02期
10 汪荣军;;左氧氟沙星眼用凝胶的制备[J];安徽医药;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邓梓健;刘彩华;陶伟;朱;;甘油温度对皮肤光透明效果的影响[A];中国光学学会2010年光学大会论文集[C];2010年
2 吴琳娟;庞杰;;低分子糖抗肿瘤活性的研究进展[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
3 郝林华;陈靠山;曲江波;杨志;;一种新型的免疫促长剂对大菱鲆生长和免疫力的影响[A];中国海洋学会海洋生物工程2005年学术年会论文集[C];2005年
4 谢绿武;郭亮;石海良;蒋小川;赵红艳;;正交试验法洗涤原油污染风砂土的初步研究[A];2010中国腐植酸行业低碳经济交流大会暨第九届全国绿色环保肥料(农药)新技术、新产品交流会论文集[C];2010年
5 陈靠山;王进昌;;牛蒡低聚果糖对植物内源水杨酸的诱导作用[A];山东省植物生物学研究进展学术年会论文集[C];2006年
6 杨清敏;邓树海;唐玮;;肺靶向多西他赛聚乳酸微球的制备及体外释药的研究[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
7 潘卫三;张志宏;彭博;李伟;刘辉;聂淑芳;唐歆;;药剂学专家系统平台创建初探[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
8 俞麟;杨子刚;常广涛;张欢;王帧;张颖;王标兵;朱文;丁建东;;一种新型的可注射的聚合物水凝胶的合成、制备和作为药物缓释载体的研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
9 何杰;高永良;;盐酸氨溴索制剂学研究与新进展[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
10 何杰;高永良;;盐酸氨溴索制剂学研究与新进展[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 左敏;Al-X(Si,Zr,Ca)-P合金中磷化物的研究[D];山东大学;2010年
2 张继芬;阿魏酸载脂质体壳聚糖微球口服给药系统的研究[D];西南大学;2011年
3 邹海艳;复方盐酸小檗碱结肠定位片的制备与体内外评价研究[D];北京中医药大学;2011年
4 杨培民;白花蛇舌草抗肿瘤有效部位黄酮和多糖的纯化及其脂质体复合物的研究[D];北京中医药大学;2011年
5 施之琪;冠心丹参多相胶囊及其体外评价方法的研究[D];广州中医药大学;2011年
6 吴卫;酶催化半乳糖酯合成及其介导多烯紫杉醇脂质体的研究[D];广州中医药大学;2011年
7 关桦楠;高效农药残留物检测酶纳米生物传感器的研制[D];东北林业大学;2011年
8 杨闯;抗VEGFR2-奥沙利铂免疫脂质体对结直肠癌靶向治疗的研究[D];重庆医科大学;2011年
9 庄宝雄;奥沙利铂脂质体的生物学研究[D];中南大学;2011年
10 赵萍;航空发动机单晶叶片的多轴低周疲劳研究[D];中南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘泳;肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定[D];华中农业大学;2010年
2 畅敏;奥沙利铂长循环热敏脂质体的研究[D];郑州大学;2010年
3 梁春丽;5-氟尿嘧啶磁性固体脂质纳米粒的制备及其药效学研究[D];郑州大学;2010年
4 张荣;氨合成系统模拟与优化研究[D];郑州大学;2010年
5 文婷;沸石吸附与化学沉淀法联用处理氨氮废水研究[D];郑州大学;2010年
6 龙玉堂;瑞兴腰痛微丸制备工艺与质量标准的研究[D];湖南中医药大学;2010年
7 徐晓立;湿疹纳米乳喷雾剂制备工艺可行性及体外透皮特性研究[D];湖南中医药大学;2010年
8 雷杨;健胃祛痛微丸制备工艺与质量标准研究[D];湖南中医药大学;2010年
9 魏玉婷;大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼对饲料中蛋氨酸、精氨酸、维生素A及维生素E需求量的研究[D];中国海洋大学;2010年
10 王一龙;聚丙烯酸增稠剂的合成与性能研究[D];中国海洋大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏东;;牛蒡多糖对小鼠免疫调节作用的研究[J];安徽农业科学;2006年09期
2 吕延成,母敬郁,王友联,杨翰仪,赵金明,张晓光,王维兴;消炎痛脂质体对兔角膜穿孔伤的疗效观察[J];白求恩医科大学学报;1997年02期
3 顾天成,许春兰;酶法水解菊粉生产果糖[J];北京轻工业学院学报;1992年01期
4 顾天成,吕跃钢;从洋姜中提取菊糖[J];北京轻工业学院学报;1998年03期
5 穆筱梅,钟振声,杨梅,陈焕钦;化妆品用果酸脂质体的制备研究[J];日用化学工业;2002年05期
6 梁玉增,鲍浪;包埋V_E和V_C的卵磷脂脂质体的合成[J];日用化学工业;1994年04期
7 陈建明,张仰眉,高申,钟延强,张雅铭;维生素A前体脂质体的研制及其特性考察[J];第二军医大学学报;2003年02期
8 杨曙明;寡糖在动物营养研究中的进展[J];动物营养学报;1999年01期
9 林中方,曾抗,周再高,李国锋,谢方明,朱晓亮,张三泉;鬼臼毒素二棕榈酰磷脂酰胆碱前体脂质体的研制及特性观察[J];第一军医大学学报;2004年07期
10 李国锋,庄志铨,周日红,周晓智;一阶导数光谱法在测定维生素E霜中维生素E含量时的应用[J];第一军医大学学报;1995年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨永胜;欧永春;阮承迈;程远国;蔡辉;张凤琴;;三氮脒脂质体对自然感染伊氏锥虫病牛的治疗效果[J];中国兽医科技;1996年04期
2 ;化工上的应用[J];生物技术通报;1987年12期
3 王璋瑜;Liposome控告Vestar[J];生物技术通报;1992年12期
4 何敏,符华林;兽用脂质体制剂的研究进展[J];兽药与饲料添加剂;2004年02期
5 柳影;李继昌;徐倩倩;孟倩;潘晓影;;单诺沙星脂质体在蛋雏鸡血浆的药代动力学[J];中国兽医学报;2009年11期
6 柳影;李继昌;孟倩;潘晓影;徐倩倩;;达氟沙星脂质体在蛋雏鸡体内的组织动力学及靶向性研究[J];中国兽医学报;2010年04期
7 何敏,符华林,李英伦;兽用脂质体制剂的研究进展[J];中国兽药杂志;2004年09期
8 宋德波;曲亚玲;杜育锋;;泰乐菌素脂质体制剂在猪呼吸道疾病上的应用[J];兽医导刊;2010年04期
9 ;泰乐菌素脂质体制剂在猪呼吸道疾病防治上的应用[J];北方牧业;2010年10期
10 杨永胜,冯淇辉,翁帼英;丙硫咪唑脂质体对山羊肝片吸虫驱虫效果的观察[J];中国兽医科技;1992年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张峰;邬晓刚;金晓国;鲍恩泉;;脂质体在中药领域中的应用研究进展[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
2 符华林;戴玉娇;;磷酸泰乐菌素脂质体的制备及体外释放动力学研究[A];兽医药品学——2010第三届中国兽药大会论文集[C];2010年
3 李旎;彭丽华;陈希;李齐梅;李平;梁文权;高建青;;卵清蛋白脂质体经皮疫苗的研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
4 程冀;季宇彬;王向涛;;脂质体载药方法的研究进展[A];中药饮片质量分析与中药鉴别技术交流研讨会论文集[C];2009年
5 柴栋;林雅艳;王睿;;抗菌药物新剂型——脂质体的研究近况及发展前景[A];第十届全国化疗药理暨抗感染药理高峰论坛资料汇编[C];2010年
6 张延君;张慧娟;金楠;张振中;赵永星;;卡培他滨脂质体的制备及在大鼠体内的药动学研究[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
7 戎佩佩;宋金春;;羟喜树碱pH敏前体阳离子纳米脂质体的制备[A];2010年全国中药学术研讨会论文集[C];2010年
8 刚宏林;杨莉斌;胡荣;;鸦胆子油脂质体的制备及质量评价[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
9 戎佩佩;宋金春;;羟喜树碱pH敏感阳离子纳米脂质体的制备[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
10 张志荣;袁志翔;;制剂创新和前药设计也是创新[A];四川省药学会第七次全省会员代表大会暨学术年会论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 沈阳药科大学药学系 吴翠栓 贾士聪;皮肤局部用脂质体制剂的研究进展[N];医药经济报;2001年
2 徐铮奎;具有划时代意义的新制剂[N];中国医药报;2003年
3 特约撰稿 蔡德山;大环内酯研发举步维艰[N];医药经济报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张继芬;阿魏酸载脂质体壳聚糖微球口服给药系统的研究[D];西南大学;2011年
2 于欢;人参皂苷Rg3脂质体的研究[D];吉林大学;2013年
3 何颖娜;用于肿瘤MRI成像和治疗的载SPIO/米托蒽醌多功能脂质体[D];北京协和医学院;2011年
4 周洪伟;人参皂苷Rg1脂质体制备及其生物物理与大鼠生物利用度评价[D];北京中医药大学;2012年
5 张蕊;去甲斑蝥素钠体内处置过程及其脂质体制剂的研制[D];山东大学;2009年
6 冯强;半乳糖脂质体阿霉素门脉灌注治疗胃肠癌肝转移的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
7 包艳洁;用于肝纤维化治疗的siRNA脂质体递送系统的建立及聚乙二醇在肝靶向的siRNA脂质体递送系统中的影响[D];华东师范大学;2013年
8 闫志强;基于LyP-1介导淋巴转移肿瘤靶向的脂质体递药系统研究[D];复旦大学;2011年
9 黄怡菲;两种抗肿瘤药物靶向脂质体的制备与评价[D];华中科技大学;2012年
10 王晖;肾上腺素纳米柔性脂质体透皮给药对跨区皮瓣成活的影响[D];中南大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡松;白藜芦醇脂质体的制备及评价[D];延边大学;2010年
2 李菲;多西紫杉醇脂质体的研究[D];山东大学;2010年
3 焦洋;杆菌肽脂质体滴眼液的研制[D];延边大学;2012年
4 王慧;盐酸阿莫罗芬乙醇脂质体及尼古丁二元醇脂质体的制备与评价[D];兰州大学;2010年
5 滕跃;重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体制备及评价[D];吉林农业大学;2011年
6 陈建霞;PEtOz脂质衍生物修饰脂质体的研究[D];辽宁师范大学;2011年
7 刘勇;三磷酸腺苷(ATP)脂质体的制备研究[D];山东大学;2011年
8 张芳;酒石酸长春瑞滨pH敏感脂质体的研究[D];山东大学;2012年
9 张立梅;脂质体包被ALV-J gp85蛋白疫苗制备及其免疫效果研究[D];山东农业大学;2014年
10 赵培起;紫杉醇多功能脂质体的体内外实验[D];天津医科大学;2011年
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