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《山东大学》 2013年
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短小棒状杆菌CpG DNA的抗肿瘤作用

孙楠  
【摘要】:近几个世纪以来,经常有关于系统性细菌感染引起肿瘤退化的报道。1890年William Coley尝试探索这一现象,他使用细菌及其产物做了一系列研究来评估其抗肿瘤作用,发现细菌虽然可以抑制肿瘤发展,但是同时含有内毒素。1994年,研究者发现细菌DNA可以起到抗肿瘤作用,同时不产生任何内毒素。后来发现细菌DNA中起到抑制肿瘤作用的是其CpG序列,该序列只存在于原核生物中,在哺乳动物中很少并且以甲基化的形式存在。本研究通过提取短小棒状杆菌(Coryn-ebacterium parvum, CP)的CpG DNA,分别在体外及小鼠体内分析其对免疫细胞和相关细胞因子的影响,研究其抗肿瘤作用。 目的: 从短小棒状杆菌中提取CpG DNA,研究其抗肿瘤作用及免疫调节机制,以期发现更有效、更稳定、更易获得的细菌CpG DNA用于肿瘤治疗。 方法: 1、使用QiAamp DNA Mini Kits从短小棒状杆菌中提取CpG DNA,分别在230nm、260nm和280nm波长下测定吸光度(A),确定CpG DNA的浓度和纯度。 2、MTT法检测不同浓度CP-CpG-DNA体外对小鼠淋巴瘤细胞YAC-1活性的影响。 3、小鼠接种Hepa1-6小鼠肝癌细胞,建立小鼠肝癌模型。分别设立空白对照组、模型对照组、短小棒状杆菌CpG DNA (CP-CpG-DNA)组、短小棒状杆菌(CP)组、大肠杆菌CpG DNA (E. coli CpG DNA)组。免疫接种实验组,隔日一次,共八次。 4、分别称重模型对照组、CP组、E.coli CpG DNA组、CP-CpG-DNA组肿瘤重量,检测CP-CpG-DNA体内抑瘤作用。 5、取被免疫小鼠脾细胞,MTT法检测不同组别NK细胞杀伤活性。 6、取被免疫小鼠巨噬细胞,酶联免疫法检测巨噬细胞分泌白介素12(IL-12)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)含量。 7、取被免疫小鼠血清,酶联免疫法检测血细胞介素2(IL-2)含量,分析对T细胞功能的影响。 结果: 1、经蛋白核酸定量测定仪检测从短小棒状杆菌中提取的CpG DNA, A260:A280可以达到1.8,说明提取的DNA纯度较高,DNA浓度为105μg/mL。 2、CP-CpG-DNA在体外可以抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1的生长和活性,并且CP-CpG-DNA浓度与肿瘤细胞抑制率呈正相关关系。 3、CP-CpG-DNA组的实体瘤明显比模型对照组的实体瘤重量轻,肿瘤生长抑制率为51.3%,可以抑制小鼠体内肿瘤生长。 4、CP-CpG-DNA组能增强荷瘤小鼠的NK细胞对靶细胞小鼠淋巴瘤细胞YAC-1杀伤活性。 5、CP-CpG-DNA组荷瘤小鼠巨噬细胞分泌IL-12的水平能力升高,并且略高于CP组和E.coli CpG DNA组。 6、CP-CpG-DNA组、CP组和E.coli CpG DNA组测得的TNF-α含量均明显高于空白对照组,但CP-CpG-DNA组、CP组和E.coli CpG DNA组之间测得的TNF-α含量基本持平。 7、CP-CpG-DNA组、CP组和E.coli CpG DNA组测得IL-2的含量略高于空白对照组。 结论: 通过体内外实验证明从短小棒状杆菌中提取的CpG DNA可以对肿瘤生长起到抑制作用,其作用机制可能是CpG DNA作为免疫调节剂刺激免疫细胞活化和增殖,诱导免疫细胞分泌细胞因子,从而抑制肿瘤细胞生长。 风疹病毒(rubella virus, RV)主要对孕早期感染妇女危害巨大,可导致胎儿患先天性风疹综合征。目前我国育龄妇女中仍存在一定比例的RV感染者,为了提高人口质量,孕期特别是孕早期妇女应及时诊断是否感染RV,进行RV-IgM抗体检测。本研究通过建立风疹病毒(RV)IgM的抗体质控盘,提高酶联免疫法和化学发光法试剂盒检测RV-IgM抗体的准确性。 目的: 研究并确立风疹病毒(RV) IgM的抗体质控,为以酶联免疫法(ELISA)和化学发光法(CLIA)为原理的风疹病毒(RV) IgM检测试剂盒的性能指标的评价提供质控物。 方法: 通过试剂盒筛选出风疹病毒IgM的阳性和阴性血清,将5份不同来源的阳性血清作为质控盘的P1~P5,将10份不同来源的阴性血清作为质控盘的N1~N10,将5份阳性血清混合制成质控盘的L1~L3,之后,将建立的质控盘用不同的试剂盒进行验证。 结果: 不同的试剂盒对质控盘的验证表明成功的建立了风疹病毒(RV)IgM抗体质控盘。 结论: 本研究建立的质控盘,可用于以酶联免疫法和化学发光法等原理的风疹病毒(RV)IgM诊断试剂盒的性能评价。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R73-36

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【参考文献】
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