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《山东大学》 2013年
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前列腺素E2-EP4受体拮抗剂对大鼠实验性自身免疫性神经炎的作用

鲁晓丽  
【摘要】:研究目的 吉兰—巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是一种常见的急性周围神经自身免疫性疾病,其病理特征主要为周围神经脱髓鞘和炎性细胞浸润,临床以肢体对称性弛缓性瘫痪为主要特征。目前,GBS的治疗主要是静脉注射丙种球蛋白或血浆置换,虽能缩短病程,加快病情恢复,但仍有大约3%~10%的病死率,20%的患者遗留不同程度的残疾。因此,有必要寻找治疗GBS的新方法。 前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)是一种重要的花生四烯酸类物质的代谢产物,具有很强的免疫活性,可以调节免疫细胞的发育、功能以及存活。前列腺素E2受体(E-prostanoid receptors, EPs)分为4个亚型,即EP1、EP2、EP3和EP4, PGE2通过EP4受体作用于T淋巴细胞和树突状细胞,促进Thl细胞的分化和Th17细胞的扩增。近年研究显示,PGE2-EP4信号在一些自身免疫性疾病中发挥着越来越重要的作用。 实验性自身免疫性神经炎(experimental autoimmune neuritis, EAN)是由CD4+T细胞介导的周围神经自身免疫性脱髓鞘疾病,是研究GBS的经典动物模型。EAN以周围神经脱髓鞘和炎性细胞浸润为主要病变,促炎性细胞因子,如IFN-γ、IL-17、IL-12等在其发病机制中起关键作用。基于以往体内外研究证实的PGE2-EP4受体拮抗剂对免疫系统的作用,我们应用PGE2-EP4受体拮抗剂L161982分别对免疫阶段和发病阶段EAN大鼠进行干预,通过观察其对EAN大鼠的临床、病理以及免疫指标的影响,评价L161982对EAN大鼠的作用并探讨其可能的免疫机制。 研究方法 1.抗原提取:采用超速离心法自牛脊神经根提取周围神经髓磷脂(Bovine Peripheral nerve Myelin, BPM)。 2.实验动物:7~8周龄雌性Lewis大鼠21只,体重150~170g,SPF级饲养。 3.建立EAN模型及临床评分:Lewis大鼠经适应性饲养(SPF级)1周后,]0%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉。将200μL抗原乳剂(含BPM5mg、结核杆菌2mg、生理盐水100μL和不完全弗氏佐剂100μL)注入大鼠双侧后肢足垫皮下。免疫当天记为0天,于免疫前1天及免疫后每日进行临床评分,直至免疫后第16天。临床评分:0:正常;0.5:全尾肌张力下降;1.0:尾部肌肉瘫,松软拖地;1.5:轻微后肢无力,肌张力下降;2.0:明显后肢无力或轻度后肢瘫;2.5:中度后肢瘫;3.0:严重后肢瘫;4.0:严重四肢瘫。 4.前列腺素E2-EP4受体拮抗剂(L161982)治疗:随机将大鼠分为治疗A组、治疗B组和对照组,每组各7只。治疗A组于免疫前1天至免疫后第8天(免疫阶段)每日腹腔注射L161982(5mg/kg),治疗B组于免疫后第5至16天(发病阶段)每日腹腔注射L161982(5mg/kg),对照组每日腹腔注射相同体积的L161982溶媒DMSO。 5.组织病理学检查:于EAN大鼠疾病高峰期(免疫后第16天)处死大鼠,取其坐骨神经近脊髓段并固定于10%中性福尔马林中,石蜡包埋,4μm纵行切片。HE染色,观察大鼠坐骨神经中浸润的炎性细胞。 6.免疫组化检查:大鼠坐骨神经石蜡切片,常规脱蜡至水,经抗原修复、阻断内源性过氧化物酶活性,滴加一抗(兔抗大鼠IFN-γ、IL-17)和二抗(辣根酶标记羊抗兔IgG多聚体),DAB显色,苏木素复染,脱水,透明,封片。40倍物镜下采集图像,观察大鼠坐骨神经中细胞阳性表达,结果以细胞数/mm2组织表示。 7.CCK8法测定体外淋巴细胞增殖无菌条件下取免疫后第16天EAN大鼠腹股沟、胭窝淋巴结制备淋巴细胞悬液,调整细胞密度为2×106/mL,接种到96孔板中,200μL/孔,分别加入10μL BPM、ConA和RPMI1640,培养72h,再加入CCK810μL/孔,培养4h后,酶标仪测定其光密度值(OD值)。 8.统计学处理:应用SPSS18.0软件,数据以x±s表示。应用单因素方差分析进行组间比较,组间差异有统计学意义则用SNK法或Bonferroni法进行组间两两比较,P0.05为差异有统计学意义。 结果 1.L161982延迟EAN发病时间、降低EAN高峰期临床评分:所有Lewis大鼠均发生EAN,与对照组相比,治疗A组、治疗B组发病时间均明显延迟(P0.05);治疗A组较治疗B组发病时间延迟(P0.05)。治疗A组疾病高峰期临床评分明显低于治疗B组和对照组(P0.05),治疗B组疾病高峰期评分与对照组比较差异无统计学意义。 2.L161982减少周围神经中炎性细胞浸润:与对照组比较,治疗A组和治疗B组疾病高峰期大鼠坐骨神经炎性细胞浸润数目均明显减少(P0.05),治疗A组坐骨神经炎性细胞浸润数目较治疗B组减少(P0.05)。 3.L161982减少周围神经促炎性细胞因子的表达:治疗A组和治疗B组疾病高峰期大鼠坐骨神经IFN-γ、IL-17阳性细胞数目均较对照组明显减少(P0.05),治疗A组大鼠坐骨神经IFN-γ、IL-17阳性细胞数目较治疗B组减少(P0.05)。 4.L161982抑制体外淋巴细胞增殖反应:于疾病高峰期检测EAN大鼠引流淋巴结淋巴细胞增殖反应,与对照组比较,治疗A组、治疗B组均能明显抑制BPM和ConA诱导的淋巴细胞增殖(P0.05)。 结论 1.在EAN免疫阶段和发病阶段应用L161982治疗,可明显延迟EAN发病时间,降低高峰期临床评分,提示L161982对周围神经自身免疫性疾病有治疗作用。 2.在EAN免疫阶段和发病阶段应用L161982治疗,可减少坐骨神经中炎性细胞浸润数目,降低坐骨神经炎性细胞因子IFN-γ、IL-17表达,抑制引流淋巴结淋巴细胞体外增殖,提示PGE2-EP4受体拮抗剂L161982可能通过抑制EAN大鼠自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达,抑制细胞免疫反应。 3.L161982降低坐骨神经炎性细胞因子IFN-γ、IL-17表达,表明PGE2-EP4受体拮抗剂非特异性作用于T细胞亚群。 4.与发病阶段治疗组比较,免疫阶段治疗组能明显延迟EAN发病时间,降低疾病高峰期临床评分,提示免疫阶段应用PGE2-EP4受体拮抗剂L161982治疗效果要优于发病阶段。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R745.43

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 谭晓冬;段瑞生;时昌文;孙若鹏;;脱氢表雄酮对大鼠实验性自身免疫性神经炎的影响[J];山东大学学报(医学版);2008年09期
2 蔡蕊;谭晓冬;;Th17相关细胞因子在实验性变态反应性神经炎中的作用[J];山东大学学报(医学版);2010年03期
3 张敬各;陈海英;秦瑾;丛斌;李巧霞;贾娴娴;马春玲;于峰;;PGE_2受体EP2和EP4调节CIA小鼠脾B细胞表面分子和细胞因子表达[J];中国病理生理杂志;2011年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 毕涌;洪娟;李佳;张旭;;调节性T细胞缓解帕金森病中多巴胺神经元炎性损伤[J];国际神经病学神经外科学杂志;2013年04期
2 单永业;李佳;罗亚文;;Th17/Treg失衡与肝脏疾病关系的研究进展[J];广东医学;2013年21期
3 张军华;文贤慧;刘凤霞;马金旗;桂嵘;;血浆置换术在吉兰巴雷综合征的应用[J];中国输血杂志;2014年01期
4 戴煜;王宁玲;王敏;王会平;储金华;杨林海;谢志伟;涂松济;谈静;;免疫抑制疗法对急性再生障碍性贫血患儿Treg/Th17细胞的影响[J];广东医学;2014年08期
5 罗健;李国忠;;Th17细胞及其在神经系统疾病中的研究进展[J];免疫学杂志;2013年05期
6 吴荷花;李春阳;董洁;王晓磊;;神经电生理检查对吉兰-巴雷综合征的早期诊断价值研究[J];内蒙古医科大学学报;2014年01期
7 张振强;宋军营;贾亚泉;刘学芳;王丛笑;吕欢欢;;高脂血症对脑缺血大鼠血管调节因子的影响[J];中国动脉硬化杂志;2014年02期
8 刘静;朱丽萍;李志国;江红艳;冯百岁;;Th17与炎症性肠病的关系[J];河南医学研究;2014年04期
9 郑珊珊;赵佩佩;臧丽丽;李胜;;Guillain-Barré综合征预后的评估及其预测因素[J];临床神经病学杂志;2014年03期
10 ;Tumor necrosis factor-alpha in experimental autoimmune neuritis[J];Neural Regeneration Research;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 陈滢宇;陈颂;符林春;郭卫中;邓文娣;赖春辉;周映云;于靓;;中药注射液喘可治对艾滋病猴模型Treg和Th17平衡的影响[A];第十一届全国博士生学术年会(生物医药专题)论文集(下册,墙报P25-P48)[C];2013年
2 肖佳;邢飞跃;George L.Tipoe;;环氧合酶1是化学肝损伤的重要保护因子[A];第十六届中国科协年会——分13感染、免疫和疫苗论坛论文集[C];2014年
3 Lihua DUAN;Jie CHEN;Quansong XIA;Min FANG;Fang ZHENG;Guixiu SHI;Feili GONG;;IL-17 Promotes Type 1 T Cell Response Through Modulating Dendritic Cell Function in Acute Allograft Rejection[A];第十六届中国科协年会——分13感染、免疫和疫苗论坛论文集[C];2014年
4 程晓蕾;陈宏;;Th17细胞与变态反应性疾病的研究现状[A];第六次全国中西医结合变态反应学术大会论文汇编[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨璐;幼年期癫痫持续状态对海马细胞因子表达的影响及干预措施的研究[D];山东大学;2010年
2 刘跃均;IL-35在急性移植物抗宿主病中的作用研究[D];苏州大学;2013年
3 任燕;CD200/CD200R1在类风湿关节炎中的作用机制和意义[D];北京协和医学院;2012年
4 王有为;脐带间充质干细胞临床前安全性研究[D];北京协和医学院;2013年
5 赵磊;外周Th17/Treg失衡在肺腺癌及肺鳞状上皮细胞癌中的作用及相关机制探讨[D];安徽医科大学;2013年
6 韩雪松;自体种子干细胞体内成骨研究[D];昆明医科大学;2013年
7 梁千;CDK5在TGF-β1诱导的EMT和乳腺癌进程中的作用机制研究[D];东北师范大学;2013年
8 熊日波;维生素对类风湿关节炎大鼠血清瘦素和其他细胞因子的影响及其作用机制[D];南方医科大学;2013年
9 向水;SOCS3在静脉移植物再狭窄中的作用及机制研究[D];华中科技大学;2013年
10 高飞;年龄相关性巨噬细胞极化对骨修复再生作用的研究[D];华中科技大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 潘月;格林巴利综合征患者外周血Th17细胞的检测及意义[D];中国医科大学;2010年
2 高艺伟;格林—巴利综合征患者血清IL-17及IL-35水平的变化及其临床意义[D];郑州大学;2012年
3 任国勇;普罗布考对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血脑屏障的干预作用及可能机制[D];河北医科大学;2013年
4 辛立建;C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中SOCS1-JAK2-STAT3信号通路作用机制的探讨[D];河北医科大学;2013年
5 杨娇;C.jejuni在不同条件下的形态学变化及GBS小鼠模型的建立[D];河北医科大学;2013年
6 王黎醒;甲氨蝶呤周期联合环磷酰胺对OVA小鼠Th17/Treg细胞平衡影响的研究[D];山西医科大学;2013年
7 赵轶;白介素-6、23、17在鼻息肉中的相关性研究[D];山西医科大学;2013年
8 张智;培菲康对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠肠黏膜屏障的作用[D];广西医科大学;2013年
9 郭丽格;吉兰—巴雷综合征患者呼吸衰竭的危险因素分析[D];大连医科大学;2012年
10 李婧;转化生长因子β1对犬穿透性角膜移植后免疫排斥的影响[D];西南大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 谢建民;王好问;陆才生;;TNF-α上调单核巨噬细胞MMP-9的活性与类风湿关节炎关节破坏的关系[J];中国病理生理杂志;2009年06期
2 刘美玲;张一娜;裴立春;张艳桥;;前列腺素E受体1在缺氧性神经细胞死亡中的作用[J];中国病理生理杂志;2010年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 朱森;杨吉春;管又飞;;前列腺素E_2受体亚型EP_2和EP_4的最新研究进展[J];临床医学工程;2009年07期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 黄蓓;重组人TNF-α受体融合蛋白联合甲氨蝶呤对小鼠胶原性关节炎的作用及TNF-α调节人滑膜细胞EP4信号的机制[D];安徽医科大学;2013年
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>安徽医科大学
相关作者
>黄蓓
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