收藏本站
《山东大学》 2016年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Yap/Taz在大鼠磨牙发育及颌骨缺损再生过程中的时空特异性表达

张冰  
【摘要】:Yap (Yes-associated protein)是重要的转录共激活因子,位于Hippo信号通路下游,首次于1995年在果蝇体内发现。有研究报道Yap在多种组织器官中均存在表达,例肠、肝脏及神经管等。Taz (transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)是一个14-3-3结合蛋白,含有一个保守的WW结构域。Taz为Hippo信号通路下游另一个重要的转录因子,是Yap的旁系同源蛋白。经典的Hippo信号通路控制组织器官的大小主要是通过调控细胞的增殖以及凋亡来实现。文献研究证实Yap/Taz在调控器官大小、干细胞自我更新、增殖及分化等方面都发挥作用。近年来有关Yap在牙胚早期发育及小鼠切牙发育中的相关报道,但对于Yap在大鼠磨牙发育过程中的研究尚未见相关报道,此外,Taz作为Yap的同源蛋白,是否参与牙齿的发育尚无研究,由此我们推测Yap/Taz可能在大鼠磨牙发育中具有特异性的表达。颅颌面骨与牙体组织的发育都源于神经嵴,在基因的表达上可能存在一定的相似性,颌骨是颅面部重要的解剖结构之一,研究发现Taz与Runx2相互作用可以提高Runx2的转录活性,促进成骨细胞的分化,在骨形成过程中发挥重要的作用,由此我们推测Taz与Runx2可能参与颌骨的修复再生过程。基于我们的推测,本研究分为两部分,第一部分以Sprague Dawley大鼠为实验动物,通过免疫组化染色及实时荧光定量PCR观察Yap/Taz在大鼠下颌第一磨牙发育过程中的时空特异性表达及检测Yap/Taz相对表达量的变化情况;第二部分构建Sprague Dawley大鼠颌骨缺损模型,通过免疫组化染色及蛋白免疫印迹检测Taz及Runx2在大鼠颌骨缺损再生过程中的表达变化情况,为探究Yap/Taz在牙齿发育及颌骨组织再生中的作用提供理论依据。第一部分Yap/Taz在大鼠下颌第一磨牙发育过程中的时空特异性表达目的:建立Sprague Dawley大鼠牙齿发育模型,观察Yap/Taz在下颌第一磨牙发育中的时空特异性表达。方法:10周龄Sprague Dawley大鼠雌雄1:1合笼,次日检栓,阴栓出现的当天中午即为受孕0.5天。获取胚胎14.5(E14.5)、16.5和18.5天及新出生(PN0)、出生后3、7、14、21和28天牙齿发育标本,通过常规固定、脱钙、脱水及石蜡包埋后,利用苏木素-伊红染色(HE染色)观察大鼠磨牙的发育形态及利用免疫组织化学染色观察Yap/Taz的时空特异性表达。此外,通过实时荧光定量PCR技术从基因水平检测Yap/Taz在出生后(PN0、PN4、PN7、PN10)大鼠牙齿发育中相对表达量的变化。结果:(1)免疫组织化学染色结果:在E14.5和E16.5天,Yap/Taz在口腔上皮和间充质中呈阳性表达,在E18.5天,Yap/Taz表达于牙乳头和整个成釉器。随着牙胚发育,在PN0、PN3、PN7天,免疫组化染色观察在成釉细胞、中间层及成牙本质细胞中均有Yap/Taz的表达,同时,在PN7天,阳性的Yap/Taz表达于上皮根鞘,在PN3、PN7、PN14天,未矿化的釉质基质中存在Yap的表达。在PN21及PN28天,Yap/Taz在尚存在分泌功能的成牙本质细胞中弱表达,然而Taz在血管内皮细胞及牙周膜和牙槽骨等牙周组织中表达较为明显。(2)实时荧光定量PCR结果:通过实时荧光定量PCR检测PN0、PN4、PN7及PN10天下颌第一磨牙牙胚中Yap/Taz相对表达量的变化情况。结果显示Yap与Taz有相似的表达趋势,PN0天,Yap/Taz的表达量相对较低,随着牙胚发育至PN4及PN7天,Yap/Taz表达显著升高,PN10天,Yap/Taz表达又出现下降趋势。PN4及PN7天,Yap/Taz的表达量相近,均明显高于PN0及PN10天。结论:(1) Yap/Taz在大鼠下颌第一磨牙发育过程中呈特异性表达与定位。(2) Yap/Taz可能参与成釉细胞及成牙本质细胞的分化,釉质的矿化、牙冠和牙根的形成以及牙周组织发育。第二部分Taz在大鼠颌骨缺损再生过程中的初步研究目的:构建Sprague Dawley大鼠颌骨缺损模型,初步探究Taz在颌骨缺损再生过程中的作用。方法:从山东大学实验动物中心购买8周龄雄性Sprague Dawley大鼠20只,于大鼠两侧下颌骨约第一、第二磨牙颊侧构建颌骨缺损模型,分别于术后3、7、14及21天取材,通过免疫组化染色观察Taz及Runx2在颌骨缺损再生过程中的表达与定位,通过蛋白免疫印迹(Western blotting)检测颌骨缺损再生过程蛋白表达水平的变化。结果:(1)免疫组织化学染色结果:在颌骨愈合的第3天,免疫组化染色显示生物膜处附着少量成纤维细胞存在Taz及Runx2的阳性表达,周围的肌纤维中可见明显的Taz及Runx2阳性着色,此外,在牙槽骨中的血管内皮细胞也存在明显阳性表达;第7天,Taz在迁移至肉芽组织中的成纤维细胞以及血管内皮细胞中呈阳性表达;第14天,骨小梁呈现不规则的排列,胶原纤维在新生骨组织处为编织状且排列无序。与早期愈合阶段相比,第21天新生骨组织面积明显变大,且骨质相对致密,免疫组化染色可见在14及21天毛细血管内皮细胞、类骨质样组织部位有Taz与Runx2的阳性表达,此外Taz在骨陷窝处可见明显的阳性表达。(2)蛋白免疫印迹结果:在大鼠颌骨缺损修复过程中,Taz及Runx2均有表达。以GAPDH为内参,将Taz与Runx2进行标准化分析发现随着愈合时间延长,二者的表达量呈现相对升高的趋势。结论:(1)Taz及Runx2在大鼠颌骨缺损再生过程中呈特异性表达。(2)Taz及Runx2可能在大鼠颌骨缺损再生过程中发挥重要的调控作用。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R782

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周晓清;孙树征;李文刚;孙树洋;;颌骨缺损修复重建58例报告[J];山东医药;2006年36期
2 彭化海,魏奉才,董作青;碱性成纤维细胞生长因子促进颌骨缺损修复的实验研究[J];山东医药;2001年17期
3 徐卫,龚蕾,赵晓莉,申琳,潘光珍;自固化磷酸钙人工骨修复颌骨缺损的临床应用[J];口腔医学研究;2004年03期
4 李祖兵;;颌骨缺损修复重建的进展[J];继续医学教育;2006年22期
5 朱良明;陶德韬;吴非非;陈伟旭;沈志铭;;钛网成形在颌骨缺损修复中的应用[J];皖南医学院学报;2010年05期
6 张昊;张丽军;韩志峰;吴燕丽;朱菲;姚丽;徐文;刘莹;;胶原基纳米骨加自体骨修复颌骨缺损的研究[J];中国骨质疏松杂志;2010年01期
7 张志勇;;种植与颌骨缺损功能重建[J];华西口腔医学杂志;2011年02期
8 卢晓蕾;;颌骨缺损修复方法的进展[J];黑龙江医药科学;2012年02期
9 罗菲;张纲;;颌骨缺损修复的研究进展[J];重庆医学;2012年36期
10 樊森;;颌骨缺损分类的探讨[J];口腔医学;1993年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘星纲;;多孔磷酸三钙/胶原复合体结合骨髓间充质干细胞修复兔颌骨缺损的实验研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
2 王冬梅;王永刚;王春仙;;36例颌骨缺损的即时修复[A];中华口腔医学会第三次全国口腔修复学术会议论文集[C];1997年
3 郭传瑸;刘筱菁;;颌骨缺损重建手术辅助机器人系统的研发[A];第九次全国口腔医学计算机应用学术会议论文汇编[C];2011年
4 蒋欣泉;潘可风;张志愿;;碱性成纤维细胞生长因子促进颌骨缺损修复的研究[A];第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编[C];2001年
5 李宁毅;商红国;高宁;;组织工程骨修复颌骨缺损的实验研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
6 王冬梅;王成焘;铁瑛;;颌骨缺损重建与生物力学研究[A];中国力学学会学术大会'2005论文摘要集(上)[C];2005年
7 陈春悠;王植三;李长贵;;异种烧结骨修复颌骨缺损的临床研究[A];中华口腔医学会成立大会暨第六次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];1996年
8 耿君华;;颌骨缺损的技工室制作体会[A];第七次全国口腔修复工艺学学术交流会论文汇编[C];2011年
9 陈江;黄文秀;杜志斌;;肿瘤切除术后颌骨缺损的种植修复[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年
10 宋萌;郭洁之;王士惟;吕臻;;天然骨无机材料修复颌骨缺损的临床研究[A];2004年上海市口腔医学学术年会论文汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 刘彦普 雷德林 罗刚;颌骨缺损修复 牙种植体显神通[N];健康报;2006年
2 康文远;能“以假乱真”的仿真赝复技术[N];中国医药报;2003年
3 康文远;仿真赝复技术塑造微笑[N];科技日报;2003年
4 记者 钱晓虎 通讯员 黄修国;国内首例钛合金3D打印下颌骨植入成功[N];解放军报;2014年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 刘勇;丙二醇/反丁烯二酰氯缩聚物复合材料在颌骨缺损修复中的应用基础研究[D];吉林大学;2005年
2 唐月军;纳米增韧(HA-ZrO_2系)生物复合多孔陶瓷的制备及其颌骨缺损修复实验研究[D];第二军医大学;2006年
3 李春明;bFGF基因修饰组织工程骨移植修复颌骨缺损及相关机制的实验研究[D];第四军医大学;2005年
4 王克涛;腺病毒介导的hBMP-2基因转移修复颌骨缺损的实验研究[D];山东大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张冰;Yap/Taz在大鼠磨牙发育及颌骨缺损再生过程中的时空特异性表达[D];山东大学;2016年
2 钟建鑫;多孔钽颗粒对颌骨缺损修复效果的实验研究[D];第三军医大学;2015年
3 商红国;组织工程骨修复颌骨缺损的实验研究[D];青岛大学;2004年
4 康红岩;重组人生长激素促进颌骨缺损修复的实验研究[D];吉林大学;2013年
5 白冰;非定向诱导的颗粒松质骨—骨髓移植重建颌骨缺损的初步研究[D];安徽医科大学;2007年
6 孙蕾;CAD/CAM技术在颌骨缺损修复和畸形整复中的应用[D];浙江大学;2009年
7 栾明亮;内源性甲状旁腺激素在小鼠牙周炎骨吸收及颌骨缺损愈合中的作用研究[D];南京医科大学;2009年
8 王桐月;应用富血小板纤维蛋白修复颌骨缺损的临床观察[D];大连医科大学;2014年
9 陈玉阳;可注射纳米壳聚糖/骨形成蛋白复合物修复大鼠颌骨缺损的实验研究[D];兰州大学;2014年
10 高同军;RP技术在口腔医学中的应用研究[D];江南大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026