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《山东大学》 2018年
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运城盐湖嗜盐细菌多样性分析及四株嗜盐新菌的多相分类

桑进  
【摘要】:许多嗜盐细菌具有独特的生理特性和代谢机制,并且能产生特殊的活性物质。因此,嗜盐细菌的分离、嗜盐机理及活性物质的研究有着特殊的意义。本文从山西运城盐湖不同湖区对盐湖沉积物样品进行采集,通过直接涂布的方法和富集培养并涂布的方法分别在正常培养基和寡营养培养基上对样品中可培养微生物进行了分离。挑取200株细菌菌株,主要分布在变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门四个门,包含29个属58个物种。比较正常培养基与寡营养培养基,直接涂布与寡营养涂布对可培养微生物分离的影响。发现在直接涂布中,寡营养培养基与正常培养基相比,微生物多样性更高,主要种类相似。与寡营养富集涂布相比,直接涂布法具有更高的微生物多样性,两者的种类分布有较大差异。在分离过程中共发现3个潜在新属及13个潜在新物种。同时,对原始样品和富集样品进行16SrDNA高通量测序,对样品中细菌的种类和分布及富集过程中微生物多样性的演替进行分析。对三个样品泥样、15天富集、30天富集以及三组相应水样共12组进行16S rDNA高通量测序。结果表明在所有样品中,变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门及放线菌门在门水平都占主要成分。样品1经过富集微生物多样性减少,而样品2、3经过富集微生物多样性增多。经过寡营养富集,厚壁菌门与放线菌门丰度显著增多,而拟杆菌门丰度略有减少,变形菌门变化不大。寡营养富集之后与之前微生物区系有所不同。经过富集之后一些稀有门类丰度有大幅增加。对原始样品及富集样品共九个样品进行聚类,原始样品聚类较近,富集样品聚类位置较近。表明寡营养富集对样品多样性的影响较为显著,富集因素是影响多样性聚类的重要因素,且富集过程对Y1和Y3样品影响较大,对Y2样品影响较小。富集过程中独有OTU数目随着富集天数增加先有明显的下降,表明了富集过程对稀有、难培养OTU可培养过程可能起到的作用。本文对四株嗜盐细菌进行了多相分类鉴定。菌株WDS4A13T分离自山东省威海市文登盐场。好氧,革兰氏阴性杆菌,不产芽孢。WDS4A13T细胞不具有运动性,无鞭毛,橘黄色菌落。最适生长温度为33℃(生长范围20-40℃),最适盐度6%(w/v)NaCl(盐度生长范围4-14%,w/v),最适pH 7(pH生长范围6.5-8.5)。唯一呼吸醌型为MK-6,主要脂肪酸(10%)为iso-C15:1、iso-C15:0和C15:0。极性脂成分为磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、心磷脂和其他一些未知的脂质(磷脂、脂和磷氨基脂)。基因组的G+C含量为35.2 mol%。根据16SrDNA序列分析WDS4A13T最相近的是冷弯曲菌属的菌株(92.0-97.3%)。系统发生学分析以及生理生化特征表明,WDS4A13T代表冷弯曲菌属的一个新的菌种,建议命名为喜盐冷弯曲菌,模式菌株为WDS4A13T(=MCCC 1H00134T=KCTC 52043T)。菌株WDS2C27T分离自山东省威海市文登盐场。好氧,革兰氏阴性杆菌,不产芽孢。WDS2C27T细胞不具有运动性,无鞭毛,橘红色菌落。最适生长温度为33℃(生长范围20-50℃),最适盐度6%(w/v)NaCl(盐度生长范围4-14%,w/v),最适pH7(pH生长范围6.5-8.5)。唯一呼吸醌醌型为MK-6,主要脂肪酸(10%)为iso-C15:0和anteiso-C15:0。极性脂主要成分为两种磷脂(PL1、PL2)、双磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺。基因组的G+C含量为35.6mol%。根据16SrDNA序列分析WDS2C27T最相近的是冷弯曲菌属的菌株(91.1-92.0%)。系统发生学分析以及生理生化特征表明,WDS2C27T代表冷弯曲菌属的一个新的菌种,建议命名为耐盐冷弯曲菌,模式菌株为WDS2C27T(=MCCC 1H00133T =KCTC 52044T)。菌株Y17T分离自山西省运城盐湖。好氧,革兰氏阴性杆菌,不产芽孢。Y17T细胞不具有运动性,无鞭毛,菌落无色半透明。最适生长温度为30℃(生长范围20-40℃),最适盐度8%(w/v)(盐度生长范围4-20%,w/v),最适pH 7(pH生长范围6.5-8.5)。根据16SrDNA序列分析Y17T最相近的是冷弯曲菌属的菌株(91.1-92.0%)。系统发生学分析以及生理生化特征表明,Y17T代表嗜纤维菌目的一个新属,建议命名为盐螺旋菌属,模式种为运城盐螺旋菌,模式菌株为Y17T。菌株Y22T分离自山西省运城盐湖。好氧,革兰氏阴性杆菌,产芽孢。Y22T细胞不具有运动性,无鞭毛,橘红色菌落。最适生长温度为30℃(生长范围20-40℃),最适盐度10%(w/v)(盐度生长范围4-20%,w/v),最适pH7(pH生长范围6.5-8.5)。根据16SrDNA序列分析Y22T最相近的是支芽孢杆菌属的菌株(91.1-92.0%)。系统发生学分析以及生理生化特征表明,Y22T代表冷弯曲菌属的一个新的菌种,建议命名为喜盐支芽孢杆菌,模式菌株为Y22T。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:Q939

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【参考文献】
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