收藏本站
《山东大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究

才晓君  
【摘要】:目的:探讨大鼠自体骨髓间充质干细胞在体外分离、培养方法,观察骨髓间充质干细胞的生物学特性;探讨对培养的骨髓间充质干细胞进行体外药物定向诱导,使其分化为心肌样细胞的方法及心肌样细胞的鉴定方法。 方法:共选取wistar雄性大鼠15只,体重180±20g,分为两组,一组7只,用Percoll分离培养法分离、培养;另一组8只,用全骨髓培养法分离、培养。15只大鼠均腹腔内注射戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉,无菌条件下断离股骨,一组7只用PBS缓沖洗股骨干及干骺端,然后用Percoll液(密度为1.073g/ml)进行密度梯度离心后,取分界面的浑浊层,.用DMEM洗细胞2遍,接种到一次性塑料培养瓶中培养;另一组8只用DMEM培养液冲洗股骨干及干骺端,接种于培养瓶中,贴壁分离出骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞混入培养体系(DMEM+15%特等优质胎牛血清+青霉素、链霉素各100 μg/ml;5%CO_2,37℃),扩增。待原代培养的细胞增殖到80%时,用0.25%牛胰蛋白酶消化细胞使之成为单细胞悬液,进行传代培养。 取生长良好的第三代骨髓间充质干细胞,胰酶消化后加入5-氮胞苷5μmol/L作用24小时,按正常培养条件培养,细胞长满培养瓶时(约5-6d)1:2.5传代,传代后进行同样的诱导、培养,倒置显微镜观察各期细胞形态的变化和生长发育情况。利用免疫荧光术、透射电镜等技术对诱导后的细胞进行鉴定。 结果:全骨髓培养法较Percoll密度梯度离心法培养的骨髓间充质干细胞纯 山东大学硕士学位论文 度高,细胞增殖能力强,在体外培养时细胞均一性较好,方法简单易行;spmol/L 的5一氮胞昔为诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化较为适合的浓度;免疫 荧光可见a一Aetin,eardiae troponinl(eTnl)阳性细胞,透射电镜观察到部分细胞形成 肌丝样结构,细胞中可见到丰富的线粒体和糖原颗粒。 结论:1全骨髓培养法是一种简便易行、有效分离骨髓间充质干细胞的方法; 2 spmol/L的5一氮胞营为诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化较为适合 的浓度;3骨髓间充质干细胞具有多能分化特性,体外培养的骨髓间充质干细胞 可在5一氮胞昔诱导下具有心肌细胞结构特点的心肌样细胞分化,为心肌细胞移 植打下坚实的细胞基础。 关键词:骨髓间充质干细胞、心肌细胞、全骨髓培养法、细胞分化、 5一氮胞普、免疫荧光术
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R541

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 高峰,蔡振杰,俞世强,胡军,胡巧侠,程亮;大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞的体外诱导分化[J];第四军医大学学报;2002年20期
2 刘晓丹,郭子宽,李秀森,张双喜,毛宁;人骨髓间充质干细胞分离与培养方法的建立[J];军事医学科学院院刊;2000年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵东海,王悦增,郭新,李玉林;人骨髓间充质干细胞的分离及鉴定[J];吉林大学学报(医学版);2005年02期
2 王五洲;邢更彦;江明;白晓东;姜川;;体外冲击波干预成人骨髓间充质干细胞的形态学研究[J];中国医师杂志;2006年08期
3 张勇,杜宏伟,邹仲敏,郭朝华,周进明,王劲,范文辉,罗成基,程天民;人骨髓间充质干细胞的分离培养及部分生物学特性的实验研究[J];第三军医大学学报;2003年04期
4 代飞,吴军,许建中,王序全,尹芝华;两种从骨髓中分离人间充质干细胞方法的比较研究[J];第三军医大学学报;2005年16期
5 李秀华;张雷;王海萍;赵春芳;尹青;;P19细胞体外DM SO诱导向心肌样细胞分化[J];第四军医大学学报;2006年02期
6 傅文玉,路艳蒙,朴英杰;人骨髓间充质干细胞的分化与端粒酶活性[J];第一军医大学学报;2001年11期
7 陈江,杨进,闫福华,赵欣;非诱导条件下犬骨髓基质细胞的生物学特性[J];福建医科大学学报;2004年04期
8 何少健,陈维平,邝晓聪;成体大鼠的骨髓间充质干细胞分离和体外培养的初步研究[J];广西医科大学学报;2002年03期
9 潘越江;华平;熊利华;王铭辉;杨艳旗;陈炬;张惠忠;张华;;体外培养鼠骨髓间充质干细胞及其向心肌样细胞诱导分化的实验研究[J];广西医学;2008年09期
10 汤治黎;章汉平;李源;黄晓娟;;丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成软骨细胞的研究[J];湖北中医杂志;2008年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 华松;武浩;张涌;;骨髓间充质干细胞定向分化的研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李志刚;血管生长素基因转染后的骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究[D];第二军医大学;2002年
2 路艳蒙;BMP12诱导骨髓间充质干细胞分化为腱细胞[D];第一军医大学;2002年
3 张勇;骨髓间充质干细胞成肌分化及其对肌损伤修复的实验研究[D];第三军医大学;2002年
4 王庆贤;髋臼骨折的生物力学及相关研究[D];河北医科大学;2003年
5 陈金武;骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究[D];第四军医大学;2004年
6 曹丰;骨髓间充质干细胞移植修复梗死心肌的应用基础研究[D];第四军医大学;2004年
7 韩冬;hBMP-2基因腺病毒表达载体体内外成骨的实验研究[D];吉林大学;2004年
8 张秀英;VEGF在骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化中的作用及分化机制研究[D];吉林大学;2004年
9 王启伟;恒河猴骨髓间充质干细胞的定向分化及其机制[D];第一军医大学;2004年
10 马勇江;骨髓与脂肪间质干细胞分离与诱导分化为成骨细胞的研究[D];西北农林科技大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董松波;5-氮胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究[D];郑州大学;2011年
2 张志逖;两种不同分离、纯化方法对SD大鼠BMSCs生物学特性影响的研究[D];泰山医学院;2011年
3 施迎兵;脑源性神经营养因子对骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑出血的影响[D];遵义医学院;2011年
4 和小娥;兔骨髓间充质干细胞分离培养及定向分化的研究[D];河南农业大学;2011年
5 倪博文;骨髓间充质干细胞移植联用促细胞生长物质对大鼠脊髓损伤后期修复的影响[D];青岛大学;2011年
6 高峰;大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的体外诱导分化研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 杨嘉宁;小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及体外定向诱导分化为神经元样细胞[D];中国医科大学;2003年
8 乌仁娜;骨髓间充质干细胞对异体T淋巴细胞几种细胞因子分泌的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
9 李文晰;不同亚型成体骨髓干细胞向肝细胞诱导分化的体外研究[D];郑州大学;2003年
10 邱丽燕;人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨树法;王淑玲;肖志峰;;血管内皮生长因子对胚胎干细胞来源神经干细胞增殖的促进[J];中国临床康复;2006年01期
2 迟作华;张洹;陆琰;;人骨髓间充质干细胞分离方法的比较[J];中国临床康复;2006年01期
3 何凤璞;汪黎明;陈鑫;;SD大鼠骨髓间充质干细胞体外原代培养及鉴定[J];现代生物医学进展;2011年03期
4 乔媛媛;张达矜;何立东;解鹏;赵晓航;;消化道肿瘤外周血循环肿瘤细胞与上皮间叶转变的相关性研究[J];海军总医院学报;2011年01期
5 张培训,姜保国;骨髓间充质干细胞的研究进展与周围神经修复[J];中国临床康复;2004年02期
6 杨清成,张向东,梁长春,杜英,李红伟;脑卒中患者鞘内神经干细胞注射半年后功能状态评估(英文)[J];中国临床康复;2005年09期
7 黄河;杨天德;杨辉;陶军;李洪;吕胜青;;氯胺酮对体外培养大鼠神经干细胞增殖与凋亡的影响[J];中华麻醉学杂志;2006年08期
8 洪德恩;;史上第一例干细胞气管移植成功[J];心血管病防治知识;2009年04期
9 卢蓉,葛坚,黄冰,黄丹平,高楠,魏雁涛,王智崇,彭展;体外诱导恒河猴皮肤干细胞分化为结膜上皮细胞的实验研究[J];中华医学杂志;2005年36期
10 时飒;金连弘;刘慧文;申景岭;李弘;徐长庆;;体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化前后离子通道基因表达的变化[J];中国临床康复;2006年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴齐全;周君梅;张胜利;马晓荣;高同斌;谢华;陈方;;人羊水来源干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
2 刘海光;张筱骅;胡孝渠;黄卡特;;ABCG2在结直肠癌中的表达及意义[A];2007年浙江省肿瘤外科学术年会暨温州医学会肿瘤分会第四届年会论文汇编[C];2007年
3 宋小飞;廖国龙;傅强;徐月敏;;大鼠脂肪干细胞诱导成肌细胞的实验研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
4 洪振亚;肖敏;方勇;杨漾;周剑峰;;As2S2对白血病干细胞的杀伤效应及其作用机制的初步研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
5 毛峰;;脂肪干细胞向神经元的诱导分化[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年
6 王尊彦;;生长因子——划时代食用干细胞产品[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年
7 刘海光;张筱骅;;SW480中侧群细胞的分选及其ABCG2的检测[A];2007年浙江省肿瘤外科学术年会暨温州医学会肿瘤分会第四届年会论文汇编[C];2007年
8 陈志胜;陈胜锋;王丙云;刘林;;小鼠孤雌胚胎干细胞建系方法与效率[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
9 刘祖梅;韩毅;杜心灵;胡燕;金满文;;成年小鼠心脏干细胞的分离、培养鉴定和离子通道特性[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
10 余细勇;;干细胞向心肌细胞分化的表观调控研究[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 吴洁;思考干细胞——研究、临床应用与产业化[N];科技日报;2001年
2 本报记者 聂翠蓉;抓住致癌的真正元凶[N];科技日报;2006年
3 记者 毛黎;美找到获取干细胞的又一新来源[N];科技日报;2006年
4 本报记者 天明;Geron公司永失所“爱”[N];中国高新技术产业导报;2001年
5 北京和讯 张明星;干细胞——最大的生命科学概念[N];中国有色金属报;2001年
6 周向东;可以让你有一个备用的脏器[N];中国医药报;2001年
7 记者王俊鸣;科学家说用干细胞可修补脑部损伤[N];科技日报;2002年
8 杨昆;干细胞启动4000亿美元市场[N];医药经济报;2002年
9 章静波;干细胞——生命科学的一个主攻热点[N];光明日报;2000年
10 通讯员 王其玲 记者 罗坚梅;干细胞,燃起人类绝处逢生新希望[N];杭州日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 江宏兵;颅神经嵴干细胞的体外分离培养及其成牙分化诱导研究[D];四川大学;2004年
2 邹西峰;骨髓源干细胞在损伤脑组织中迁移和分化的研究[D];第一军医大学;2004年
3 邓蔓菁;面突外胚间充质干细胞的多向分化及永生化[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
4 江小霞;人骨髓间充质干细胞对树突状细胞免疫功能的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
5 孔祥永;人胎儿肺上皮细胞的发育分化及其干细胞的初步鉴定[D];第一军医大学;2004年
6 庞希宁;干细胞诱导分化为神经细胞的研究[D];中国医科大学;2005年
7 方利君;骨髓间充质干细胞转化为皮肤组织的实验研究[D];中国医科大学;2004年
8 高文根;自体骨髓CD34~+干细胞移植治疗冠心病心肌梗死的实验研究[D];第四军医大学;2005年
9 刘宏伟;骨髓干细胞动员与移植治疗心肌梗死比较[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
10 金丹;逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究[D];第一军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 才晓君;大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究[D];山东大学;2005年
2 丁昌青;从胶质瘤细胞系U87中提取培养并鉴定胶质瘤干细胞[D];青岛大学;2009年
3 刘丹丹;人骨髓间充质干细胞向内皮细胞体外诱导分化的实验研究[D];吉林大学;2004年
4 黄宇婷;骨髓来源干细胞异位向子宫内膜方向分化的研究[D];复旦大学;2009年
5 孙杰;乳腺癌MCF-7和乳腺病变的干细胞分化及其神经内分泌分化的研究[D];大连医科大学;2007年
6 周德存;人骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的实验研究[D];安徽医科大学;2003年
7 陈伟;人骨髓间充质干细胞集落培养及其生物学特性的研究[D];第一军医大学;2004年
8 牛茜;前胃泌素在胃癌干细胞中表达的初步研究[D];兰州大学;2011年
9 官晓清;骨髓间充质干细胞透过新生大鼠血脑屏障的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
10 徐洪璋;骨髓间充质干细胞的相关研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026