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《山东大学》 2005年
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可调控的烟草叶绿体转基因表达体系研究

李朔  
【摘要】:利用叶绿体转基因技术,有可能在高等植物叶绿体中高效表达外源蛋白,与核转化技术相比较,有表达效率高、安全性好、可直接表达原核基因等特点和优点。但同细胞核转基因一样,叶绿体转基因也存在抗生素标记的生物安全性和外源基因的过量表达对植物正常生长发育的影响的问题。本论文对在烟草中建立核质互作的叶绿体表达体系进行了探索。核质互作的叶绿体表达体系的建立是同时对烟草的叶绿体基因组和核基因组进行转化,在核基因组中转入乙醇诱导型启动子(Alc启动子)启动下的T7 RNA聚合酶基因,而在叶绿体中转入T7启动子启动下的外源基因(GUS或纳豆激酶NK)。这样,既可以实现外源基因在叶绿体中的高效表达又能对其进行人工调控,而且不致影响植株的正常生长。 在本论文中,首先对烟草进行了核基因组转化,转入包含Alc启动子的T7 RNA聚合酶基因表达盒,对转化植株进行了PCR和基因组Southern-blot检测和RT-PCR检测,证明了外源基因的插入和表达。其次,构建了两个烟草叶绿体表达载体和两个莴苣叶绿体表达载体,它们分别包括烟草和莴苣的叶绿体同源片段、不同外源基因(GUS和NK)的含T7启动子的表达盒以及筛选标记基因BADH的叶绿体表达盒,并对所构建载体中的BADH表达盒在大肠杆菌中的表达进行了酶活检测。最后,用构建的叶绿体表达载体和实验室已有的以aadA为筛选标记基因的烟草叶绿体表达载体分别对野生型烟草和T7 RNA聚合酶核转化烟草进行叶绿体转化,得到抗性植株,并对转化的结果进行了分析。论文中还对非抗生素筛选标记基因BADH在烟草叶绿体转化中的应用进行了尝试,得到了一批甜菜碱醛抗性和PCR阳性转化植株,并初步得出了其应用有局限性的结论。 在论文的第二部分中,发现了化合物甜菜碱醛对组织培养中莴苣分化再生的促进作用。实验证明,在培养基中添加适当浓度(5mM)的甜菜碱醛可以显著增强莴苣分化再生能力,其愈伤组织诱导率和分化率分别提高29.3%和42.0%。在论文中,对甜菜碱醛促进莴苣分化再生能力的原因进行了讨论分析。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943.2;S572;S636.2

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【引证文献】
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1 李俊;中国沙棘体细胞胚胎的发生及BADH遗传转化拟南芥相关研究[D];北京林业大学;2008年
【参考文献】
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1 杨淑英,张建新,吕家珑,史荣力;外源甜菜碱对冬小麦抗旱性生理指标的影响研究[J];西北植物学报;2000年06期
2 孙文越,王辉,黄久常;外源甜菜碱对干旱胁迫下小麦幼苗膜脂过氧化作用的影响[J];西北植物学报;2001年03期
3 张建新,徐福利,吕家珑,李亚兰,李东;外源甜菜碱对作物的抗旱作用效果研究[J];干旱地区农业研究;2003年02期
4 景蕊莲,昌小平,胡荣海;外源甜菜碱对小麦幼苗抗旱性的影响[J];干旱地区农业研究;1998年02期
5 侯丙凯,张中林,周奕华,章银梅,沈桂芳,陈正华;油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性[J];高技术通讯;2000年07期
6 骆爱玲,刘家尧,马德钦,王学臣,梁峥;转甜菜碱醛脱氢酶基因烟草叶片中抗氧化酶活性增高[J];科学通报;2000年18期
7 梁峥,马德钦,汤岚,洪益国,骆爱玲,戴秀玉;菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因在烟草中的表达[J];生物工程学报;1997年03期
8 梁峥,骆爱玲;甜菜碱和甜菜碱合成酶[J];植物生理学通讯;1995年01期
9 张士功,高吉寅,宋景芝;外源甜菜碱对盐胁迫下小麦幼苗体内几种与抗逆能力有关物质含量以及钠钾吸收和运输的影响(简报)[J];植物生理学通讯;2000年01期
10 熊延,刘翠敏,王淑芳,王宁宁,王勇;叶绿体基因组与叶绿体基因表达的调节[J];植物生理学通讯;2002年03期
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1 隋娜,李萌,田纪春,孟庆伟,赵世杰;K~+对水分胁迫下超级小麦幼苗生理特性的影响[J];山东农业科学;2004年06期
2 朱玉庆;唐薇;罗振;孙学振;董合忠;;转AhCMO基因棉花品系苗期耐盐性的比较研究[J];山东农业科学;2008年06期
3 汪有元;李维江;董合忠;;不同化学试剂处理对棉花种子萌发和抗盐性的影响[J];山东农业科学;2010年03期
4 翟乃家;刘蔚霞;乔健;黄志银;;甜菜碱浸种对盐胁迫下棉花种子发芽及其幼苗生理活性的影响[J];山东农业科学;2012年05期
5 许柯;王玉伟;商艳芳;;叶绿体基因组的转化研究[J];安徽农学通报;2007年17期
6 陈哲;孔祥翔;张斐斐;龚明;;植物抗逆性基因工程研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
7 许锁链;柯学;陈凯;龚明;;甜菜碱与植物抗逆性机理的研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年07期
8 赵华,曹云英,季本华;细胞相容性物质及其基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2004年02期
9 汪耀富,蔡寒玉;烟草抗旱生理生化研究进展[J];安徽农业科学;2005年03期
10 何礼军;周冀衡;杨虹琦;;提高烟草抗旱能力的研究进展[J];安徽农业科学;2006年02期
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1 夏会龙;程文伟;池小雅;;Cd胁迫对甘蔗生长及生理性状的影响[A];有毒化学污染物监测与风险管理技术交流研讨会论文集[C];2008年
2 王海光;李自超;;植物干旱胁迫应答基因及其产物研究进展[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
3 刘录祥;赵林姝;梁欣欣;郑企成;刘强;王晶;郭会君;赵世荣;陈文华;;基因枪法获得逆境诱导转录因子DREB1A转基因小麦的研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
4 程林梅;孙毅;任永玲;;转基因耐盐植物研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
5 侯喜林;徐明宇;张蜀宁;;不结球白菜不同倍性材料间光合特性差异研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
6 尹璐璐;;蔬菜抗冷性诱导物质研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
7 林栖凤;邓用川;吴多桂;陈菊培;李冠一;;耐盐辣椒分子育种研究[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
8 李伟明;张寒霜;赵俊丽;付书平;;植物耐盐基因工程进展及棉花应用展望[A];中国棉花学会2005年年会暨青年棉花学术研讨会论文汇编[C];2005年
9 孙华;张崇玉;;甜菜碱的渗透调节功能及其应用研究进展[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
10 刘慧;王本杰;袁桂艳;郭瑞臣;;三叶保健吸品的有效成分测定及其质量控制[A];2006年山东省医院药学学术研讨会论文汇编[C];2006年
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6 杨莎;低温胁迫下甜椒CBF3基因的表达和功能研究[D];山东农业大学;2011年
7 于莹;利用羊草EST文库克隆耐盐碱相关基因[D];吉林大学;2011年
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9 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
10 闫永庆;松嫩平原盐碱胁迫对目的园林植物生理生态学影响[D];东北林业大学;2010年
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2 付雪林;转Bt基因甘蓝的抗虫性研究[D];华中农业大学;2010年
3 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
4 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
5 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
6 张璐;丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿耐盐性的影响[D];山东农业大学;2010年
7 李树芬;甜菜碱提高转基因番茄耐热性研究[D];山东农业大学;2010年
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9 张华永;γ-氨基丁酸(GABA)对玉米幼苗抗逆性的效应、作用机理及调控[D];山东农业大学;2010年
10 齐照良;小麦苗期抗旱性QTL分析和冰草BADH基因克隆[D];山东农业大学;2010年
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1 郭祖宝;李学红;孙培良;;影响胡萝卜体胚发生因素的研究[J];安徽农学通报;2006年12期
2 武芸;丁莉;;转基因农作物的安全性及其发展前景[J];安徽农业科学;2007年07期
3 吴月亮;蔡明;蒋细旺;张启翔;;植物甜菜碱合成相关酶及其基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2007年18期
4 付立新,袁芳,赵晓南,王成波;沙棘果汁深加工研究及应用[J];北方园艺;2001年01期
5 宗世祥,贾峰勇,骆有庆,许志春,张连生,梁树军;沙棘木蠹蛾危害特性与种群数量的时空动态研究[J];北京林业大学学报;2005年01期
6 范双喜;;植物组织培养中胚状体诱导的研究[J];北京农学院学报;1993年02期
7 王金英,马中国,宗灿华;果胶的提取与应用[J];中国林副特产;2000年02期
8 王强龙;王锁民;张金林;包爱科;陈托兄;楼洁琼;陆妮;;根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化紫花苜蓿的研究[J];草业科学;2006年12期
9 梁慧敏,夏阳,王太明;植物抗寒冻、抗旱、耐盐基因工程研究进展[J];草业学报;2003年03期
10 崔凯荣,刘志学,陈克明,王亚馥;石刁柏组织培养中体细胞胚发生的组织细胞学观察[J];西北植物学报;1993年03期
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1 陈兴江;烟草抑芽基因克隆及遗传转化研究[D];华南热带农业大学;2005年
【二级参考文献】
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1 杨淑英,张建新,吕家珑,史荣力;外源甜菜碱对冬小麦抗旱性生理指标的影响研究[J];西北植物学报;2000年06期
2 张士功,高吉寅,宋景芝;盐分胁迫条件下甜菜碱对小麦幼苗体内Na~+、K~+和Cl~-的含量及其分布的影响[J];西北植物学报;1999年02期
3 景蕊莲,昌小平,胡荣海;外源甜菜碱对小麦幼苗抗旱性的影响[J];干旱地区农业研究;1998年02期
4 胡荣海,昌小平;反复干旱法的生理基础及其应用[J];华北农学报;1996年03期
5 陈以峰,周燮;氯化胆碱对多种逆境下作物膜稳定性的影响[J];华北农学报;1997年02期
6 肖岗,张耕耘,刘凤华,王军,陈受宜,李聪,耿华珠;山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因研究[J];科学通报;1995年08期
7 侯彩霞,徐春和,汤章城,沈允钢;甜菜碱对PSⅡ放氧中心结构的选择性保护[J];科学通报;1997年17期
8 张建新,李亚兰,徐福利,李东,段群堂,王林乾,王银福;MFB多功能抗旱剂对小麦产量与品质的影响[J];麦类作物学报;2000年04期
9 梁峥,马德钦,汤岚,洪益国,骆爱玲,戴秀玉;菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因在烟草中的表达[J];生物工程学报;1997年03期
10 徐福利,严菊芳,王渭玲,张建新;MFB多功能抗旱剂在旱地小麦上的应用效果初报[J];陕西农业科学(自然科学版);2000年03期
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3 周宝宏;;叶绿体基因启动子的研究进展[J];生物学通报;1990年10期
4 周睿,赵敏,马俊莹,孙山,张国珍;叶绿体基因与光合作用[J];山东农业大学学报(自然科学版);1991年02期
5 彭乙冬;;重组体叶绿体基因在细胞核中的插入和表达[J];生物技术通报;1988年10期
6 李健仔,李思光,罗玉萍,陈少风;猕猴桃属植物叶绿体基因PCR-RFLP分析[J];植物研究;2003年03期
7 李健仔,李思光,罗玉萍;猕猴桃干叶片DNA的提取及叶绿体基因PCR-RFLP反应[J];生物技术;2003年03期
8 徐振彪;宋林霞;;叶绿体的遗传工程应用研究[J];安徽农业科学;2007年23期
9 于惠敏;解相林;;叶绿体的“内共生”与“基因转移”现象[J];生物学通报;2007年10期
10 徐绍颖;;从细胞核向外移动的基因[J];全球科技经济瞭望;1989年08期
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1 马今方;欧阳敏;迟伟;张立新;;拟南芥TRAN蛋白调节叶绿体基因编码蛋白跨膜转运的机理研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
2 宋葆华;汪小全;李法曾;;朴科为一多系群——来自叶绿体基因matK的又一证据[A];第六届全国系统与进化植物学青年学术研讨会论文摘要集[C];2000年
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4 徐相波;邱登林;孙永堂;王守经;孙桂芝;李新华;;PPR基因家族的研究进展[A];第五届核农学青年科技工作者学术交流会论文集[C];2006年
5 彭连伟;张凤;郭进魁;陈翠云;马今方;蔡文和;张立新;;调节光系统Ⅱ电子传递的基因功能研究[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
6 涂庆华;;植物细胞中的ATP合酶[A];2005'海峡两岸植物生理与分子生物学教学研讨会论文集[C];2005年
7 孔萌萌;余庆波;张慧琦;杨仲南;;控制水稻叶绿体发生相关基因OsALB23的定位及分析[A];长三角现代植物生物学与农业专题论坛论文集[C];2005年
8 谈凤笑;钟扬;施苏华;;使君子科(Combretaceae)风车子亚科(Combretoideae)分子系统学研究:来自叶绿体基因与核基因序列的证据[A];第七届全国系统与进化植物学青年学术研讨会论文摘要集[C];2002年
9 李娘辉;;光合作用光系统内容的教学探讨[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
10 魏慧敏;张年辉;杜林方;;光抑制诱导的D1蛋白聚合和磷酸化以及弱光下修复过程中D1蛋白的解聚、去磷酸化和降解[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
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1 曾万勇;水稻叶绿体基因组序列的拼装验证和多态性分析[D];四川农业大学;2002年
2 崔玉琳;亚心型扁藻细胞核与叶绿体稳定转化系统的构建[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
3 赵宣;芍药属牡丹组(Paeonia sect. Moutan)种间关系及栽培牡丹的起源[D];西南大学;2007年
4 刘全兰;小麦族披碱草属(Elymus L.)的分子系统发育与进化研究[D];复旦大学;2005年
5 郭亚龙;稻族的分子系统学研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2005年
6 沙莉娜;赖草属植物的形态学、细胞学与分子系统学研究[D];四川农业大学;2008年
7 张同武;植物细胞器基因组测序,组装及比较基因组学研究[D];浙江大学;2012年
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9 杜芳;基因流速度与种间渐渗和物种界定:云杉属线粒体和叶绿体DNA群体遗传学的证据[D];兰州大学;2010年
10 张扬勇;甘蓝类蔬菜的细胞质DNA多样性研究[D];中国农业科学院;2011年
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