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人类CYP2A13基因SNPs及其与喉、咽、鼻恶性肿瘤危险性的相关性研究

史丽  
【摘要】:目的 检测分析可能改变酶的代谢活性的人类细胞色素P450(CYP)2A13基因的单核苷酸多态性。测定CYP2A13基因的等位突变位点频率并分析其意义。 方法 收集32例中国患者(10例喉癌和6例下咽癌,2例鼻腔肿瘤,5例鼻息肉和9例其他的头颈部疾病患者)外周血DNA标本,采用长片段聚合酶链式反应(Long-Distance PCR)方法,根据全人类基因数据库(GenBank accession no. AC008962[GenBank])中的CYP2A 13基因序列进行设计,5′端上游引物1和3′端下游引物2被用来扩增全长CYP2A 13基因。32例基因DNA样本被扩增为包含人类CYP2A 13基因的基因片断,扩增片断9456bp,开始于ATG起始密码前1117 bp,终止于终止密码TGA后869 bp。所有的PCR产物用扩增引物进行排序,排序区间涵盖ATG起始密码前约1千个碱基对、所有的外显子和外显子与内含子的连接以及TGA终止密码后约100 bp。所有的长片段-PCR扩增产物均使用QIAquick Gel Extraction kit(QIAGEN)进行凝胶纯化然后经自动DNA测序仪(model 3100)进行测序检测。 结果 检测结果共有14个突变位点被发现,其中4个位于编码区,而其他10个则位于非编码区:2个位于5′侧翼,2个位于3′非翻译区,6个位于内含子。所有检测到的不同等位基因均为杂合子。 检测到的4个编码区单核苷酸多态中,位于外显子5由3375CT错义突变引起的精氨酸(Arg)257(Cys)半胱氨酸,在7个样本中被发现,


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