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棉铃虫蜕皮调节转录因子-激素接受子3基因的特征及功能

张玉宝  
【摘要】:棉铃虫(Helicoverpa armigera)是一种危害性极大的昆虫,每年都给我国及全世界造成巨大的经济损失,因而它的防治工作也越来越引起人们的重视。然而,传统的杀虫方式由于效果差、污染环境严重等问题而不再适合形势的需要。生物农药杀虫就是适应这一需要而产生的。其中,通过抑制其蜕皮来达到杀虫目的是一条较好的途径。这就需要对棉铃虫的蜕皮机理有非常详细的了解,而整个蜕皮过程是一套复杂的涉及众多基因参与的级联反应过程。要全面认识这个过程,首先要选好候选基因,然后进一步研究与之相关的基因和其他蛋白因子,以此类推,逐步掌握蜕皮过程机理。本实验选择的候选基因是棉铃虫蜕皮调节转录因子-激素接受子3基因。 激素接受子3(Hormone Receptor 3)是一种蜕皮调节转录因子(Molt-Regulating Transcription Factor),属于孤儿核受体基因超家族,调控蜕皮过程中相关基因的表达,是蜕皮相关基因早期基因簇的典型表达产物,可与DNA上特定的序列结合,参与蜕皮激素诱导的晚期基因的转录活性产物的调控,是蜕皮级联反应中的关键因子。棉铃虫蜕皮激素接受子3(HHR3)是HR3家族成员之一,它调控棉铃虫的蜕皮过程。棉铃虫HHR3基因全长1668bp,即HHR3蛋白为556个aa,分子量为61.16kDa。在大肠杆菌中表达得到的是GST-HHR3融合蛋白,分子量为94kDa左右。 本人选取棉铃虫为实验材料,以已知的棉铃虫蜕皮调节转录因子-激素接受子3基因(HHR3)为候选基因,利用本实验室提供的在大肠杆菌融合表达的GST-HHR3进行了下游研究,然后提取棉铃虫基因组DNA,Rsa Ⅰ酶切消化后加上接头,PCR扩增,以提高DNA片段的丰度,让PCR产物与HHR3蛋白结合,再通过兔抗HHR3抗体免疫沉


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