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《山东大学》 2005年
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嗅鞘细胞移植联合应用NGF治疗脊髓损伤的实验研究

孙卫山  
【摘要】:目的:研究联合应用嗅鞘细胞(OECs)和神经生长因子(NGF)移植治疗脊髓损伤时脊髓运动功能的恢复、神经电生理的改善、病理形态学的改变情况以及它们之间的相互关系。以此来判断两者联合应用的效果、其是否较应用单一因素能使脊髓功能得到更好的修复,嗅鞘细胞和神经生长因子是否在修复脊髓损伤过程中产生协同作用及其可能的机制,为临床上急性脊髓损伤的治疗提供理论依据。 方法: 1.嗅鞘细胞的原代培养与纯化:取健康成年wistar大鼠,体重200-250g,断颈处死后迅速取出两侧嗅球,立即置于D-Hanks平衡盐溶液中,除去嗅球被膜,然后用D-Hanks液冲洗两遍:在手术显微镜下仔细分离嗅球最外两层(嗅小球层和嗅神经层),将分离的组织剪成1mm见方的小块,加入0.25%的胰蛋白酶,37℃消化20分钟;800rpm离心5min,清洗2次,吸弃上清液后加入含10%FBS(胎牛血清fetal bovine serum FBS)的DMEM 2-3ml,终止消化;用酒精灯火焰刨光的直头滴管反复吹打组织,细胞液过100μm细胞筛;800rpm离心5min除去上清液;用DMEM稀释细胞浓度至1x10~6/ml,接种于培养瓶,置于培养箱(37℃,5%CO_2)内培养。培养24h后,将培养上清连同未贴壁细胞吸出,重新种植于经多聚右旋赖氨酸处理的6孔板,加DF12培养液(DMEM:F12 1:1 FBS 10%青霉素100IU/L)3mL进行培养。培养1周后加入Ara-C(终浓度5-10mol/L)作用48h;清洗后培养液中加入2μM Forskolin和20μg/ml牛垂体提取液BPE,继续进行培养。每2天换液一次,观察细胞生长情况,间断摄片,培养至14天。移植用OECs大部分采用直接消化收集,终浓度为1×10~7/ml;少部分用双苯亚甲胺进行核标记。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R651.2

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【共引文献】
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