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《山东大学》 2005年
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单细胞分析的新方法和肾上腺素细胞传感器

夏方诠  
【摘要】:第一章对单细胞分析技术及其在生命科学研究上的应用性进行了综述。分别对毛细管电泳检测的理论和技术,2003年之后毛细管电泳检测方法在分析单细胞上的应用,微流控芯片在细胞培养、细胞操作和细胞内组分测定等方面的应用,影像学单细胞分析方法(包括荧光显微术、共聚焦激光扫描显微术、全内反射荧光显微术)在单细胞分析上的应用进行了简单介绍及综述。 第二章中我们建立了未见报道的微流控芯片电泳/柱端安培法检测单个细胞中化学组分的方法。在这个方法中,我们在双T型微流控芯片上实现了单个细胞的电动进样、转移和破膜,并使用安置在双T型微流控芯片的末端电化学检测器对单个细胞中的物质进行了检测。通过在微流控芯片的多通道体系中调整电压,完成了单个原生质体的电压控制进样,并通过施加一个220 V/cm的直流电压将细胞在芯片内溶膜。细胞溶膜后,细胞中要检测的物质在微流控芯片的分离通道中进行电泳分离,并在末端由电化学方法检测。用这个方法测定了单个小麦(Cha9)愈伤组织细胞中的抗坏血酸。 第三章中我们设计了利用荧光共振能量转移(FRET)原理检测CEA mRNA含量的方法。在这个方法中,将两种荧光染料标记的核酸探针与目标mRNA杂交,杂交后两种荧光染料的距离满足产生FRET的条件,通过检测核酸杂交后FRET的强度,可以测定目标mRNA的含量。我们用这种方法测定了MGC 803胃癌细胞提取液中CEA mRNA的含量。 第四章中我们将第三章所研究的FRET测定mRNA的原理应用到测定单个细胞内mRNA的含量。在至今所有报道的定量测定单细胞中化学组分分析的论文,细胞都是溶膜后再进行测定。在这种情况下,检测过程中细胞都已死亡。在绝大多数单细胞中化学组分定量分析的论文中,细胞是一个一个分析的,分析速度较慢,从细胞取样到测到信号通常需要十几分钟到几十分钟,即分析通量很低。在本章中我们研究成功了一种高通量定量测定活细胞中mRNA的方法。在这个方法中,首先用毛地黄皂苷将细胞膜蚀孔,使荧光核酸探针能够自由扩散进入细胞并同细胞内的mRNA杂交,荧光探针与mRNA杂交后在激光的照射下产生FRET。使用高灵敏CCD同时获取大量单个MGC 803细胞的FRET荧光图像,
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q2

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