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雌激素预防早产儿视网膜病变的实验研究

马晓华  
【摘要】:目的:观察生理浓度的雌二醇(E_2)在不同氧环境下,对培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRECs)的影响及对SD大鼠早产儿视网膜病变(ROP)模型视网膜新生血管形成的影响,探讨E_2对ROP的预防作用以及可能的作用机理。 方法:1.以培养的BRECs为模型,在正常O_2环境及缺O_2环境下,给予不同生理浓度的E_2(浓度分别为10~(-12),10~(-10),10~(-8)mol/L)或PBS作用不同时间(8h,24h),RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA、一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。硝酸还原酶法测定NO的释放。 2.制造SD大鼠ROP模型,分别在高O_2[(75±2)%O_2]饲养(P1-7)及正常空气饲养(P8-14)阶段或全程(P1-14)中,给予皮下注射E_2(lug/rat/day,E_2溶解于乙醇,用PBS稀释为0.1mL/rat)或皮下注射溶媒(PBS)0.1mL/rat/day,每日观察新生鼠的发育情况。生后7天(P7)、14天(P14),各组鼠分别随机取3只,腹腔麻醉后,心腔穿刺并注射墨汁,行视网膜铺片,观察视网膜血管发育情况;断头处死动物,摘除眼球,RT-PCR检测视网膜VEGFmRNA、HIF-1αmRNA、eNOSmRNA的含量;生后14天(P14)的眼球行组织切片HE染色,观察视网膜新生血管生长情况;免疫组化染色,观察VEGF蛋白的表达;透射电镜观察视网膜超微结构变化。 结果:1.BRECs VEGFmRNA、HIF-1αmRNA、eNOSmRNA的表达: 1-1.低O_2条件下BRECs的HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、eNOSmRNA表达较正常O_2条件下明显增多(P<0.05),且VEGFmRNA、HIF-1αmRNA两者之间有明显的相关性(r=0.82)。 1-2.正常O_2条件下,给予不同生理浓度E_2(10~(12),10~(-10),10~(-8)mol/L)作用24h,显示E_2呈浓度依赖性促进BRECs的VEGFmRNA、eNOSmRNA表达(P<0.05)。10~(-8)mol/L E_2作用8、24h,VEGFmRNA、eNOSmRNA表达量呈时间依赖性增多(P<0.05);E_2不影响HIF-1αmRNA的含量(P>0.05)。 1-3.低O_2条件下,给予不同生理浓度E_2(10~(-12),10~(-10),10~(-8)mol/L)作用24h,


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