支气管上皮细胞在哮喘气道重建中的作用

【摘要】： 目的:通过采用Western-blot法和RT-PCR法分别检测永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)在不同浓度屋尘螨抗原Der p的作用下TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、IL-13 mRNA的表达变化,并采用细胞免疫化学技术检测人胚肺成纤维细胞(HLF)在不同浓度屋尘螨抗原Der p作用下的纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化,探讨支气管上皮细胞在哮喘气道重建中的作用。 方法: (1)培养永生化人支气管上皮细胞(BEP2D),根据加入屋尘螨抗原浓度的不同分为四组:空白对照组、0.2 ug/mL Der p1组、2.0 ug/mL Der p1组和10.0 ug/mL Der p1组,每组均按照不同的作用时间进行培养:24 h、48h和72 h,然后收集细胞,采用Western blot法和RT-PCR法测定BEP2D在不同浓度Der p1、不同作用时间下的TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、IL-13 mRNA的表达水平变化。 (2)培养人胚肺成纤维细胞(HLF),按照屋尘螨抗原Der p浓度的不同分为四组:空白对照组、0.2 ug/mL Der p1组、2.0 ug/mL Der p1组、10.0ug/mL Der p1组和LHC-8*组(LHC-8,为支气管上皮细胞培养液,是加入10.0ug/mL Der p1后培养BEP2D 72 h后收集的),每组均按照不同的作用时间24h、48 h和72 h进行培养,然后采用细胞免疫化学的方法,观察纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平变化。 (3)统计处理用SPSS10.0统计软件,所有数据均以均数±标准差((?)±s)表示,样本间均数的比较采用t检验,变量间的关系采用Pearson直线相关分析,P＜0.05表示有统计学意义。 结果: (1)永生化人支气管上皮细胞系(BEP2D)在0.2 ug/mL Der p1组中经过24 h、48 h、72 h的培养,根据Western blot实验结果和RT-PCR实验结果,TGF-β1、Smad2、IL-13蛋白的表达量和相应mRNA的表达水平与空白对照相比没有明显增加;在2.0 ug/mL浓度Der p1作用时,各时间点的TGF-β1、Smad2、IL-13蛋白的表达量和相应mRNA的表达水平均较0.2ug/mL Der p1相应时间点水平明显上升,有统计学意义(P＜0.05);10 ug/mL浓度Der p1作用时,各时间点上述蛋白和相应mRNA的表达水平较2 ug/mL相应时间点水平有增加明显,有统计学意义(P＜0.05)。 (2)人胚肺成纤维细胞(HLF)在空白对照组、0.2 ug/mL Der p1组、2.0 ug/mL Der p1组和10.0 ug/mL Der p1组中,在3个不同时间的作用下,纤连蛋白(FN)和肌动蛋白(α-SMA)的表达均呈阴性或弱阳性,无明显统计学差别。在LHC-8*组中成纤维细胞在24 h、48 h、72 h培养下,纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达随着时间增加呈上升趋势,各时间点的表达差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 屋尘螨抗原不能直接作用于成纤维细胞使其表达发生改变,但可通过作用于支气管上皮细胞,激发其合成释放的TGF-β1、Smad2、IL-13激增,导致气道炎症增加。支气管上皮细胞通过表达这些细胞因子的增加作用于肺成纤维细胞,引起纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达上升,在基底膜纤维化中发挥作用,从而参与哮喘的气道重建过程。