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《山东大学》 2008年
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细胞因子MIF靶向的新型炎症显像剂的实验研究

张超  
【摘要】: 为了探讨以MIF为靶向进行炎症显像的可行性,本研究所自行制备了放射性碘化标记的抗MIF单克隆抗体(anti-MIF McAb)及其对照抗体IgG,并在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和医用松节油诱导建立的三种小鼠炎症模型体内进行了生物学分布和显像的实验研究。研究内容分为以下三部分: 第一部分:放射性碘化标记anti-MIF McAb和IgG的制备及生物学活性鉴定 目的 采用固相Iodogen法碘化标记anti-MIF McAb和IgG,对其标记率、放射化学纯度、稳定性及生物学活性进行系列研究,为下一步的研究提供实验基础。 方法 采用固相Iodogen法,~(125)I和/或~(131)I分别碘化标记了anti-MIF McAb和IgG。检测放射性碘化标记anti-MIF McAb及其对照抗体在室温储存不同时间后的放射化学纯度,观察其在体外的稳定性。以酶联免疫吸附法检测放射性碘化标记anti-MIF McAb的免疫学活性。 结果 1.~(125)I-anti-MIF McAb的标记率为82.35%,放化纯为98.25%,放射性比活度为29.56 GBq/μmol。 2.~(131)I-anti MIF McAb的标记率为87.25%,放化纯为97.10%,放射性比活度为29.56 GBq/μmol。 3.~(131)I-IgG的标记率为81.56%,放化纯为97.17%,放射性比活度为30.12GBq/μmol。 结论 三种标记物的稳定性和免疫活性良好,达到了用于进一步实验研究的要求标准。 第二部分~(125)I—anti—MIF McAb在小鼠炎症模型体内的生物学分布研究 目的 建立金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和医用松节油诱导的三种小鼠炎症模型,观察~(125)I-anti-MIF McAb在三种小鼠炎症模型的体内生物学分布,同时利用磷屏进行放射自显影炎症显像研究。 方法 1.建立小鼠炎症模型:BALB/c小鼠60只随机分为3组,每组20只。利用大肠杆菌、金葡萄球菌、松节油诱导建立小鼠炎症模型。 2.~(125)I-anti-MIF McAb在炎症模型小鼠的体内分布:对每种炎症模型的小鼠采用腹腔注射法注射~(125)I-anti-MIF McAb 0.2ml约3.7MBq。在完成注射后第30min、4h、24h、48h和72h,从3组炎症小鼠中随机各取出3只脱臼处死,解剖取出全部炎症组织、心、肝、脾、肺、肾、骨、甲状腺、胸腺和左侧对照肌肉组织的样本,称重,利用γ计数器测定各器官或组织的放射性计数(cpm),并计算其平均cpm/g;测定~(125)I-antiMIF McAb注入量标准源的放射性计数,计算各器官或组织内放射性占标准源放射性的百分比(%ID)、T/NT。 3.金黄色葡萄球菌组、大肠杆菌组、松节油组炎症模型小鼠各5只尾静脉注射3.7MBq 0.2mL~(125)I-anti-MIF McAb,在注射后24h、48h、72h分别用0.06%戊巴比妥0.2ml麻醉炎症模型小鼠,俯卧在磷屏上进行放射自显影。 4.以RT-PCR、免疫组化法检测小鼠炎症模型炎症组织MIF基因及蛋白表达水平的变化,以证实放射性碘化标记的anti-MIF McAb在炎症部位的浓聚是由局部高表达的MIF基因及蛋白引起的。 结果 1.三种小鼠炎症模型在注射~(125)I-anti-MIFMcAb后30min,血液和肾、肝、脾等器官组织内的放射性计数均迅速增高,持续增高至4h后迅速降低,24h以后下降缓慢。在各器官组织中以肌肉和股骨内的放射性计数在各时间点为最低。 2.炎症部位的放射性摄取在注射~(125)I-anti-MIF McAb 4h后开始明显增加,金葡菌组炎症部位24h的摄取最高,48h炎症部位摄取迅速跌落形成峰状;而松节油组4h炎症部位摄取即达较高值并持续至48h,72h迅速跌落;大肠杆菌组从4h开始炎症部位的放射性积聚一直持续缓慢增加,但其摄取均低于金葡菌组和松节油组。各时间点T/NT比值随时间的增加而逐渐升高:金葡菌组在30min即可升至4,24h金葡菌组、大肠杆菌组和松节油组分别为9.65、3.46和5.37,以后T/NT比值继续升高,48h三组小鼠炎症模型的T/NT比值均达到了7以上。炎症部位的放射自显影结果与体内生物学分布观察到的T/NT变化相一致。 3.RT-PCR、免疫组化结果表明:小鼠金葡菌炎症组织中MIF mRNA、MIF蛋白高表达,与炎症显像浓聚程度正相关。 结论 ~(125)I-anti-MIF McAb能够靶向性聚集于炎症病灶,且在靶组织中清除缓慢,放射自显影与体内生物学分布观察到的T/NT变化相一致。 第三部分~(131)I-anti-MIF McAb和~(131)I-IgG 在小鼠炎症模型体内生物学分布的对比研究 目的 建立金黄色葡萄球菌小鼠炎症模型,对比研究~(131)I-anti-MIF McAb和~(131)I—IgG在小鼠炎症模型体内的生物学分布及磷屏显像特点 方法 1.建立BALB/c小鼠金葡菌炎症模型。 2.40只模型鼠随机分为两组,采用尾静脉注射法,每只模型小鼠注射~(131)I-anti-MIF McAb或~(131)I-IgG各0.2ml约3.7 MBq。 3.在注射后24h、48h和72h,从两组炎症小鼠模型中随机各取出5只脱臼处死,解剖取出全部炎症组织、心、肝、脾、肺、肾、骨、甲状腺、胸腺和左侧对照肌肉组织的样本,称重,利用γ单道能谱仪测定各器官或组织的放射性计数(cpm),并计算其平均cpm/g;测定~(131)I-IgG注入量标准源的放射性计数,计算各器官或组织内放射性占标准源放射性的百分比(%ID)。 4.从两组炎症小鼠模型中随机各取出5只,分别在24h、48h、72h用0.06%戊巴比妥0.2ml麻醉,进行磷屏自显影显像。 结果 1.~(131)I-anti-MIF McAb和~(131)I-IgG在炎症模型鼠体内的分布各自有明显不同的特点。~(131)I-IgG组血液放射性明显高于~(131)I-anti-MIF McAb,且消减缓慢,而~(131)I-anti-MIF McAb组肝、脾及肾的放射性在各时相均较~(131)I-IgG组高,差异有显著性(p<0.05)。 2.注射~(131)I-anti-MIF McAb和~(131)I-IgG 24h后,炎症部位均有较多的放射性浓聚。~(131)I-anti-MIF McAb的炎症部位积聚量在注射后24h、48h、72h均明显高于~(131)I-IgG组(p<0.05),表明~(131)I-anti-MIF-McAb在炎症部位有比~(131)I-IgG更特异的浓聚。 3.炎症部位的放射自显影显像结果与体内生物学分布观察到的生物学分布变化相一致。 结论 与~(131)I-IgG相比,~(131)I-anti-MIF-McAb在炎症部位更具有靶向的特异性浓聚。~(131)I的半衰期8天,比较适合于临床显像。 本研究结果表明:放射性碘化标记的抗MIF单克隆抗体(anti-MIF McAb)制备简便、性能稳定,能够靶向性聚集于炎症病灶,且在靶组织中清除缓慢,放射自显影图像质量好,为其临床应用研究提供了可靠的实验依据。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R817

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