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《山东大学》 2009年
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谷氨酰胺强化肠外营养对大鼠小肠粘膜缺血再灌注损伤的影响

彭利盼  
【摘要】: 目的正常肠粘膜细胞对缺血极不耐受,当机体发生小肠移植、创伤、严重感染及失血性休克等严重应激反应时,小肠可出现血液低灌注并造成大量氧自由基及细胞因子的产生与释放,从而发生缺血再灌注损伤(Ischemia/Reperfusion Injury,IRI)。谷氨酰胺(Glutamine,Gln)是一种具有多种生物活性作用的“条件必需氨基酸”,是小肠黏膜重要的代谢能源。在上述病理状态下,谷氨酰胺消耗大大增加,使得体内Gln缺乏,从而诱发或加重肠粘膜损伤。研究显示通过外源性补充谷氨酰胺可代偿其过度消耗,在防止缺血再灌注损伤方面具有重要作用。本实验利用大鼠小肠缺血再灌注模型,观察谷氨酰胺强化肠外营养对大鼠小肠粘膜屏障作用的影响,并检测血红氧和酶-1(HO-1)表达进而探讨谷氨酰胺作用的可能机制。 资料和方法 1、实验动物及分组:雌性Wistar大鼠(山东大学实验动物中心提供)30只,随机分为三组:正常对照组(N组,n=10),传统肠外营养组(total parenteralnutrition,TPN组,n=10)和谷氨酰胺强化肠外营养组(TPN+Gln组,n=10)。 2、动物模型:适应性喂养5天后,无菌条件下经腹正中切口入腹,显露肠系膜上动脉。正常对照组只轻柔的翻动相关肠段数次后置回腹腔,另外两组用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉30min,松开止血夹再灌注4小时后缝合关腹。参照Steiger等的方法将大鼠麻醉后经颈外静脉行上腔静脉置管,固定并将导管经皮下隧道自颈背部引出。置管当日起TPN组和TPN+Gln组予以完全肠外营养,共给予5天;正常对照组以常规饲料喂养。5天后后剖杀取材。 3.观察指标:包括光学显微镜下观察HE染色小肠粘膜形态,采用高效液相色谱仪测定静脉血浆及粘膜细胞内Gln浓度,改良的酶学分光光度法检测血浆D-乳酸水平,偶氮显色鰲试剂法测定血浆内毒素水平,ELISA法检测炎性介质TNF-α和IL-6,以及免疫组织化学法染色小肠粘膜监测HO-1蛋白的表达和RT-PCR法检测粘膜细胞HO-1mRNA的表达。 4.统计学处理:采用SPSS15.0软件,所有数据以x±s表示,组间比较经t检验处理,p<0.05为差异有显著性,p<0.01为非常显著性差异。 结果 1.外源性补充谷氨酰胺可明显提高血浆和小肠粘膜谷氨酰胺水平。 2.外源性补充谷氨酰胺可明显改善缺血再灌注小肠粘膜组织形态,降低血浆D-乳酸、内毒素和TNF-α、IL-6水平,促进HO-1蛋白和HO-1mRNA表达。 结论 1.通过正常对照组和两实验组之间、两实验组之间比较,外源性补充谷氨酰胺可以明显减轻大鼠缺血再灌注小肠黏膜屏障损伤及炎性反应,保护黏膜屏障完整性。 2.外源性补充谷氨酰胺可以促进HO-1mRNA表达及HO-1合成,HO-1及其代谢产物有抗氧化、抗凋亡及抗炎作用,可能是谷氨酰胺可能的作用机制及临床应用依据。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R574;R459.3

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