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《山东大学》 2009年
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聚羟基脂肪酸酯在大肠杆菌中的合成、降解以及分子改造

王倩  
【摘要】: 聚羟基脂肪酸酯(PHA)是微生物体内合成的一类生物聚酯,PHA不仅具有与传统化学合成高分子相似的材料性质,而且还具有一般传统塑料没有的性质,如生物可降解性、生物相容性、压电性、光学活性等特殊性质。因此,PHA的应用范围非常广,可用作工业、农业、医药、食品业中各种绿色包装材料的原材料。由于PHA可以通过很多可再生资源获得,因此具有巨大的经济价值。除了大批量生产PHA用于包装材料之外,PHA还是一种具有特殊应用的极好的医学材料,由于PHA能够与哺乳动物的组织相容,并且缓慢降解;另外,PHA具有一定的力学性能,可用作骨移植的支架。近年来,越来越多的学者注重于研究PHA在医药及组织工程等方面的应用。在全球环境面临白色污染威胁、人类健康面临严重器官和组织的障碍及丧失的今天,更应该大力发展PHA产业,开发更好性能的PHA以适应各种特殊应用。 对于PHA的研究已经有七十多年的历史了,从最初聚-3-羟基丁酸酯(PHB)天然颗粒的提取,到聚羟基丁酸羟基戊酸酯(PHBV)的工业化生产,再到PHA的新单体、新基因、新菌种,不同的发酵底物、合成途径以及代谢调控等等的新发现,加上蛋白质组学和代谢组学的相辅相成,人们对PHA的研究越来越广、也越来越深入,可开发的资源就越来越少。因此,怎样从一个新的视角入手研究PHA的新功能是本论文的目的之一。 在利用大肠杆菌基因工程菌高产PHB时,我们发现大肠杆菌在积累大量的PHB(达细胞干重的90%)后,不单没有影响到细胞内的渗透压,而且仍然可以生产琥珀酸等一些有机酸类,因此我们致力于发现和找到PHB对重组大肠杆菌的“贡献”以及它的机制。 PHA是细菌在生长条件不平衡时的产物(比如碳源过剩,氮源缺乏时),在环境不利时消耗掉以躲过恶劣环境的伤害,提高菌体对外界的适应能力。本论文首次在大肠杆菌中研究了PHB合成和降解对于宿主菌的有利作用。模仿PHB自然合成菌,成功地构建了一种压力诱导的启动系统来表达PHB合成和降解酶基因,无需进行人工诱导,只是在在压力情况下诱导PHB的合成和降解,就如同自然合成菌一样;顺利的表达了PHB合成及降解酶基因,得到了一株高产PHB以及3-羟基丁酸的工程菌。同时还验证了大肠杆菌利用3-羟基丁酸途径的存在,我们对大肠杆菌中3HB-CoA合成酶的活性进行了体外检测,发现在ATP以及CoA存在时,即能够将3-羟基丁酸转化为CoA形式而进入能量代谢循环,从而为细胞提供能量。 菌体不仅在碳源丰富时积累PHB,在氮源缺乏的环境中,这种不理想的条件非常有益于PHB的产生和积累。氮源的利用率是一个限制性因素,为了研究氮源限制也能够在重组菌E.coli DH5α(pSCP-CAB/pQWQ2)中诱导PHB产生,本实验以M9为基础培养基(含2%的葡萄糖),而变化NH_4Cl的浓度(0.2 g/L,1 g/L,2.5 g/L,5 g/L),在这四种培养条件下观察PHB的诱导情况。实验结果表明:低浓度氮源会诱导重组菌更快的更多的积累PHB。 同时,重组菌对外界压力的适应能力是通过饥饿实验和抗性试验检验的:积累PHB的工程菌E.coli DH5α(pSCP-CAB/pQWQ2)在经过32天的饥饿条件下,仍然可以存活和繁殖,这是普通大肠杆菌所不具有的,实验证明普通大肠杆菌在饥饿培养32天之后,存活率不到1%;同时探究了PHB合成和降解的这种循环机制对大肠杆菌抗性的影响,分别对大肠杆菌进行了热击、紫外照射、酸、高渗溶液的处理,发现产并能降解PHB的菌株E.coli DH5α(pSCP-CAB/pQWQ2)均具有较高的存活率,说明重组菌获得PHB生产能力后,菌体的各种抗性指标(如:耐饥饿存活率,抗氧化,抗热,抗辐射能力以及抗酸能力)均有较大提高,为工业上利用大肠杆菌生产各种物质,提供一个稳定抗逆菌株打下良好基础。 PHA家族是一个非常庞大的家族,目前已经发现PHA至少有150种不同的单体结构,并且还在不断地发掘出新的单体。在PHA家族中,单纯的PHB或PHA都由于其性能的缺陷影响了它的应用范围。因此开发具有高性能的PHA-co-PHB共聚物是国际上的研究热点。PHA聚合酶是生产共聚物的关键。 本研究以改变PHA聚合酶的底物特异性入手,通过对PHA聚合酶分子的改造,使其能够聚合本来不能利用的前体物,成为一种具备广泛底物特异性的酶,从而也就增加了PHA单体的种类。我们的目的是构建一个既有SCL-PHA合成能力又有mcl-PHA合成能力的PHA合酶,那么这个酶应该同时具有Ⅰ类合酶和Ⅱ类合酶的性质。本论文首次引入了递增截短法来构建一个具有广泛底物特异性的PHA合酶的杂合酶。它的优点是避免了在构建杂合酶时融合位点难于把握的问题,并且通过文库筛选可以得到更多有活性的广底物特异性的酶。 将Ⅰ类PHB合酶和Ⅱ类的mcl-PHA合酶同时克隆于一个载体上,转化大肠杆菌E.coli LS5218ΔfadA进行发酵生产,结果表明重组菌能够生产PHB/mcl-PHA的共混物,而且惊喜的发现PHB含量在85~95%。为进一步大规模生产优良性能的PHB/PHA共混物提供了良好的开端。然后,对PHA合酶进行的分子进化改造,我们通过递增截短文库法将合成mcl-PHA的合酶基因phaCl基因从3′端向5′端酶切,并将合成SCL-PHA的合酶基因phbC基因从5′端向3′端酶切,得到了不同程度酶切的杂合酶基因文库,通过对文库的进行尼罗红筛选和基因大小的筛选得到了25株能够合成PHB的重组茵,发现随着杂合酶phbC的5′端的逐渐切除,其PHB合酶的活性也逐步降低。根据最近的报道是将PhbC氨基端82个氨基酸切除后还能保持一定体内活性,85个氨基酸就完全失去活性,也就是是说其最小功能区既是切掉82个氨基酸之后的区域。我们通过构建缺失体库而获得的杂合酶首次发现了在83-100甚至120个氨基酸缺失后仍然有活性。这就说明,PHB合酶的递增缺失发现其氮端的缺失可以通过PHA合酶PhaCl的互补进行弥补。将失去活性的PHB合酶能够再次合成PHB;通过递增截短文库法构建的杂合酶,经筛选得到了3株克隆,检测这些酶发现,在体内既可以利用葡萄糖为碳源合成PHB,也可以利用脂肪酸(癸酸盐)为碳源合成P(HB-co-HA)共聚物,说明了PhaCl的氮端不仅仅是对杂合酶起到保护作用,而且可能含有底物的结合区域,因此能够结合中长链的羟脂酰CoA底物。这种人工改造的杂合酶性质稳定,易于控制表达,其延伸强度好等更加优越的性能,接近于低密度聚乙烯,在不久的将来必会得到广泛应用。 PHA合酶的性质研究也是近年来备受关注的,PHA生产的关键技术之一就是提高PHA合酶的聚合能力。而聚合能力的提高与了解PHA合酶的催化以及结构性质密切相关。近年来普遍认为,PHA聚合酶是以二聚体的形式催化3-羟基丁酰CoA合成高分子量聚酯PHA的,从酶的催化机制可以推测在体内酶的存在形式是单体与双体的平衡状态。并且认为聚合酶的二聚体是酶存在的活性形式;PHB颗粒的形成存在两个假说,近来越来越倾向于“出芽”模型,即PHB颗粒是从内膜上形成并脱落的,但是没有直接证据证明以上理论的正确性。本论文首次通过绿色荧光蛋白(GFP)片段重组装系统对PHB合酶的相互作用进行了检测,利用的是两个在大肠杆菌中相兼容的载体分别为pET11a-NGFP,及pMRBAD-CGFP,两个载体上分别有GFP的两部分片断,通过将待检测相互作用的两个基因分别与NGFP、CGFP的融合表达,再将两个载体同时转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),表达融合蛋白后,只有当蛋白发生相互作用时,GFP两部分相互靠近重组装,从而发出荧光。结果证明:只有在有底物3-羟基丁酰CoA存在的情况下,重组菌才会发出荧光,说明PHB合酶发生了相互作用,在体内形成二聚体然后催化PHB的形成的。在没有底物3-羟基丁酰CoA的情况下,PHB合酶并不或不主要以二聚体形式存在,GFP无法靠近形成重组装。因此观察不到GFP的绿色荧光。同时,若存在二聚体,通过对产荧光二聚体的实时示踪,可以观察在PHB颗粒形成早期,脂单层膜的来源。从而验证“出芽”模型的理论的正确性。该过程将会利用电镜技术帮助更好的验证。由于荧光显微镜不易观察到PHB颗粒的发生和形成,对这部分实验进行了进一步探索,利用荧光能量共振转移技术对其的研究正在进行中。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q819

【引证文献】
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1 徐操;群体感应对铜绿假单胞菌胞内聚羟基脂肪酸酯合成的调控[D];河北师范大学;2011年
2 盛欣英;以剩余污泥为原料合成聚羟基脂肪酸酯的研究[D];山东大学;2012年
【参考文献】
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1 吴琼,孙素琴,余海虎,陈新滋,陈国强;聚羟基脂肪酸酯细菌合成的生长环境依赖性[J];高分子学报;2000年06期
2 甘智雄,张广,莫晓燕,陈国强,吴琼;嗜水气单胞菌WQ中PHBHHx的合成及其分子基础研究[J];微生物学报;2003年06期
【共引文献】
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1 冯佳颖;顾科菲;陈佩佩;陈春红;虞方伯;;聚羟基烷酸合成菌的分离·鉴定及其生长特性研究[J];安徽农业科学;2010年03期
2 吴国娟,张中文,穆祥,刘凤华,稻富秀夫,长泽弘;中药免疫增强剂的研究概况[J];北京农学院学报;2001年01期
3 李宏;江澜;;土壤重金属污染的微生物修复研究进展[J];贵州农业科学;2009年07期
4 陈国强;;生物塑料聚羟基脂肪酸酯PHA发展近况[J];塑料制造;2009年07期
5 吴琼,孙素琴,余海虎,陈新滋,陈国强;聚羟基脂肪酸酯细菌合成的生长环境依赖性[J];高分子学报;2000年06期
6 Peter H.Yu;FUNCTIONAL POLYHYDROXYALKANOATES SYNTHESIZED BY MICROORGANISMS[J];Chinese Journal of Polymer Science;2000年05期
7 魏晓星;李正军;陈国强;;我国聚羟基脂肪酸酯产业链的发展概况[J];高分子通报;2011年04期
8 孙素琴,郁监源,胡鑫尧;分子光谱法无损鉴别生药材的最新进展[J];光谱学与光谱分析;1999年06期
9 孙素琴,梁曦云,杨显荣;六色灵芝的FTIR快速无损鉴别[J];光谱学与光谱分析;2002年02期
10 杨姣兰,罗添;傅里叶变换红外光谱分析技术在预防医学领域的应用[J];光谱学与光谱分析;2002年04期
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1 陈国强;;Polyhydroxyalkanoates-An Exciting Novel Polymers for Biomaterial Study[A];2004年中国材料研讨会论文摘要集[C];2004年
2 王佳堃;刘建新;;瘤胃纤维分解功能基因的筛选与利用[A];动物营养研究进展(2012年版)[C];2012年
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1 周波;枯草芽孢杆菌Na-002纳豆激酶基因的克隆、表达及定点突变研究[D];山东农业大学;2011年
2 陈泉;重组大肠杆菌生产短链聚羟基脂肪酸酯PHB及PHBV的途径构建与代谢改造[D];山东大学;2011年
3 马占强;苜蓿中华根瘤菌CCNWSX0020抗铜基因的克隆与功能验证[D];西北农林科技大学;2011年
4 李金娟;活性污泥利用挥发性脂肪酸储存聚羟基脂肪酸酯的研究[D];天津大学;2012年
5 江春玉;植物促生细菌提高植物对铅、镉的耐受性及富集效应研究[D];南京农业大学;2008年
6 杭晓明;聚羟基脂肪酸酯(PHA)合酶基因的克隆、表达及功能性研究[D];大连理工大学;2002年
7 董洁;金属结合肽的微生物展示与筛选及生物吸附作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
8 田树君;嗜水气单胞菌中聚羟基脂肪酸酯包涵体蛋白PhaP的研究[D];中国农业大学;2005年
9 何进;几种微生物及其代谢产物的毛细管电泳方法研究[D];华中农业大学;2003年
10 郑重;聚羟基脂肪酸酯材料的改性和生物合成[D];清华大学;2005年
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4 李雪云;嗜麦芽寡养单胞菌产聚羟基烷酸酯的研究[D];华南理工大学;2011年
5 江逢春;脂肪酶的新型毕赤酵母表面展示及其在非水相催化中的评价[D];华南理工大学;2011年
6 刘明明;PHA颗粒表面结合蛋白作为生物表面活性剂的应用研究[D];汕头大学;2011年
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8 耿艳平;聚羟基丁酸酯颗粒在重组人组织纤溶酶原激活剂(rPA)表达中的应用[D];山东大学;2011年
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【同被引文献】
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1 郭小品;毕东苏;;剩余污泥厌氧消化过程中的物质转化及其资源化研究进展[J];安徽农业科学;2010年20期
2 赵鸣,吴广芬,李刚;污泥资源化利用的途径与分析[J];环境科学与技术;2005年02期
3 许旭萍,陈接锋,谢华玲;次氯酸钠-氯仿提取球衣菌PHB的研究[J];福建师范大学学报(自然科学版);2004年01期
4 贺文楠,张增民,胡平,陈国强;以葡萄糖为碳源合成生物降解性聚酯的研究[J];高分子学报;1999年06期
5 赵璇;王兰;唐静;孙莹;;利用固定化XN1菌连续生产微生物絮凝剂的研究[J];中国给水排水;2011年03期
6 杨青,贺青;聚羟基烷酸(PHA)的回收方法[J];工业微生物;1999年02期
7 刘艳玲,任南琪,刘敏,王爱杰,李建政,吴忆宁;气相色谱法分析厌氧反应器中的挥发性脂肪酸(VFA)[J];哈尔滨建筑大学学报;2000年06期
8 李自托;张方;韩秋燕;;生物降解塑料发展现状及展望[J];化学工业;2007年10期
9 尹进,于慧敏,李红旗,沈忠耀;用十二烷基磺酸钠纯化重组大肠杆菌中的聚-β-羟基丁酸酯[J];化工学报;1998年03期
10 严群,堵国成,陈坚;真氧产碱杆菌利用混合有机酸生物合成聚羟基烷酸酯[J];化工学报;2003年11期
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4 陈接锋;产聚β-羟基丁酸球衣菌分离筛选及发酵和提取的研究[D];福建师范大学;2003年
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6 陈柳清;极端嗜盐菌XMQ19菌株发酵生产聚羟基烷酸酯(PHA)的提取工艺研究[D];华中农业大学;2008年
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1 郭勇;永井和夫;田村学造;;二环素对大肠杆菌蛋白质合成的选择性作用[J];微生物学报;1982年01期
2 云溪;纤维单胞菌fimi的纤维素酶基因在大肠杆菌中分子克隆(重组DNA:pBR322质粒;免疫检测)[J];中国生物工程杂志;1984年01期
3 ;基因工程[J];生物技术通报;1985年02期
4 ;疫苗[J];生物技术通报;1985年11期
5 ;基因工程[J];生物技术通报;1985年12期
6 ;基因工程[J];生物技术通报;1986年01期
7 陈永青;;大肠杆菌DNA复制起始点(oric)与12KD膜蛋白的结合特性[J];生物化学与生物物理进展;1986年02期
8 ;基因工程[J];生物技术通报;1986年10期
9 ;疫苗[J];生物技术通报;1987年06期
10 魏燕玲,张意仲,黄上媛,徐国洲,王红旗,刘建刚;单克隆抗体ELISA检测产毒大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的应用研究[J];中国人兽共患病杂志;1988年05期
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1 欧阳萍;雷连成;吕爽;韩文瑜;;人溶菌酶基因在大肠杆菌中的融合表达及其生物学活性的研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
2 王鹏雁;陈创夫;张再超;毛志福;任艳;;表达大肠杆菌K88ac-STⅡ的口服沙门氏菌活苗的动物免疫试验[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
3 杨海华;;肉鸡支原体与大肠杆菌混合感染病例的综合诊治[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];2011年
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5 覃宗华;谢明权;蔡建平;艾哈迈德;彭新宇;魏文康;吴惠贤;;毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
6 孙伟;潘石;李银丽;宋林峰;张毅;吴世法;;大肠杆菌与副流感病毒样品的原子力显微镜成像研究[A];大珩先生九十华诞文集暨中国光学学会2004年学术大会论文集[C];2004年
7 赵姗姗;张桂荣;于艳辉;张忆华;;头孢他啶诱导大肠杆菌内毒素释放的研究[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];2005年
8 刘昀;李冉辉;郑易之;;大豆PM2(LEA3)蛋白及22-氨基酸结构域在植物和大肠杆菌中的耐盐功能鉴定[A];2006年中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
9 王小娟;陈向东;;属间细菌质粒自然遗传转化[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
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1 记者  陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;2006年
2 裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的方法[N];中国医药报;2009年
3 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
4 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
5 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
7 记者 冯卫东;除菌香皂其实并不除菌[N];科技日报;2007年
8 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
9 宁夏隆德县畜牧兽医站 罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;2007年
10 赵承渊 北京大学第一医院;“怪病”频出:医学昌明的代价?[N];大众科技报;2011年
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1 王倩;聚羟基脂肪酸酯在大肠杆菌中的合成、降解以及分子改造[D];山东大学;2009年
2 姜中其;仔猪断奶腹泻性大肠杆菌的多重耐药性、毒力因子分布及特异性蛋黄抗体药效的研究[D];浙江大学;2009年
3 郑宗宝;一体化生物加工过程进行大肠杆菌的半纤维素琥珀酸生产[D];天津大学;2012年
4 康振;大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D];山东大学;2011年
5 孙凤军;大肠杆菌生物膜的形成及其耐药质粒传递和调控的研究[D];第三军医大学;2009年
6 李晓敏;大肠杆菌氧胁迫适应性蛋白质组学、O-抗原研究和嗜热菌NG80-2醛脱氢酶分子生物学研究[D];南开大学;2010年
7 李丹;尿道致病性大肠杆菌进化机制的研究及检测方法的确立[D];南开大学;2010年
8 彭亮;聚磷酸盐激酶1在脑膜炎大肠杆菌K1株致病中的相关功能研究[D];南方医科大学;2011年
9 马毅;多个药物靶标蛋白在大肠杆菌无细胞系统高效表达及功能表征[D];华南理工大学;2012年
10 杨金丽;应用饲料油脂防控牛感染大肠杆菌0157:H7的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
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1 高鸿雁;大肠杆菌微生物传感器的性质及大肠杆菌代谢动力学研究[D];沈阳师范大学;2011年
2 孙超;水体中大肠杆菌的检测分析新方法研究[D];东华大学;2010年
3 赵阳;黑龙江省部分地区鹅大肠杆菌的分离鉴定[D];东北农业大学;2011年
4 王晓强;血小板反应素1活性cDNA片段的克隆与表达[D];四川大学;2005年
5 周璇;重组人IZ-CD40L在大肠杆菌中的高效表达和生物学活性的鉴定[D];苏州大学;2005年
6 陈文静;家禽养殖场废弃物农用安全性的初步研究[D];扬州大学;2010年
7 师震宇;禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究[D];南京农业大学;2011年
8 张建军;大肠杆菌F18菌毛操纵子fed基因的克隆、表达及其生物活性的初步研究[D];扬州大学;2005年
9 涂健;抗生素和内毒素诱发鸡肠源性大肠杆菌易位的实验研究[D];安徽农业大学;2005年
10 王雷;致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a、b、c因子单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年
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