收藏本站
《山东大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

B-CLL细胞内BCR相关因子及其信号通路表达与交互关系的研究

开心  
【摘要】: 慢性B淋巴细胞白血病(B cell Chronic lymphocytic leukemia, B-CLL)作为最普遍的白血病类型之一,主要发生在老年人群中。其主要特征是具有成熟细胞表型但其功能缺失的CD5+, CD23+ B淋巴细胞在外周血、骨髓、淋巴节、脾和肝等免疫器官中的增殖与累积。B-CLL的病因及发病机制在发育免疫学研究中迄今尚不清楚,但已发现在B-CLL患者体内,白血病细胞经历了从正常B细胞转变为具有B-CLL临床表征克隆的演化,在此过程受到作为决定B细胞命运的B细胞受体(B cell receptor, BCR)编辑及其信号通路的持续影响。 最近的一系列研究进展,加深了对于B-CLL细胞中BCR及其信号通路的了解。例如表面BCR的低表达,IgHV基因的突变状态以及ZAP70和CD38在不同亚型B-CLL中的差异表达。这些发现清楚地显示了在B-CLL细胞中存在BCR信号通路的异常调控,对此核心问题的深入研究,将从解读B-CLL的演变过程的分子机制中对此疾病发生环节的靶向治疗提供理论依据。 本论文以BCR相关分子及其介导的信号通路作为研究对象,利用western blotting, real-time RT-PCR,免疫共沉淀,流式细胞术,RNA干扰等技术比较系统地研究了在B-CLL细胞与正常人外周血B细胞,以及不同亚型外周血B细胞之间的重要基因和蛋白的差异表达及其互作关系,并对B细胞癌变及其与发育相关的分子机制进行了理论概括。 BCR抑制受体CD22相关因子及其介导的信号通路在B-CLL细胞中的表达:本研究首先采集了63个B-CLL患者和60个正常人外周血临床样本,利用多抗体混合物交联多余细胞增加细胞密度后,Ficoll缓冲液密度梯度离心收集到纯度为83%±8%的B细胞,提取其总蛋白和nRNA作为主要研究材料。利用Western blotting技术及N-糖苷酶F(PNase F)消化糖蛋白N'端寡糖单元的方法检测了BCR抑制受体CD22的表达,确定其同工型CD22a和CD22(3同时存在于B-CLL细胞中,且蛋白表达量出现了适当的下调。通过比较B-CLL细胞和正常B细胞的CD22胞质尾区ITIMs基序磷酸化,发现了CD22起抑制作用的激活状态在B-CLL细胞中显著降低。利用免疫共沉淀技术观察到CD22对其下游信号分子SHP-1的更新作用明显减少,显示出B-CLL细胞中CD22介导的BCR抑制信号通路的缺失。 通过磷酸化CD22发现抑制BCR功能的Lyn蛋白在B-CLL细胞中高表达,real-time RT-PCR结果表明该现象不依赖于mRNA转录调控,而其活性和无活性磷酸化形式均存在不同程度的增强,但相对于过表达的Lyn总蛋白无一状态占明显优势。依赖Lyn活化的酪氨酸激酶Syk,是介导BCR激活信号通路的重要分子,其蛋白在B-CLL细胞内表达正常,但其激活磷酸化形式过表达,显示B-CLL细胞中Syk下游信号通路的持续激活。 E3泛素蛋白连接酶c-Cbl在B-CLL细胞中的表达及功能研究:为深入了解B-CLL细胞内对BCR信号通路相关蛋白起降解作用的蛋白泛素化-蛋白酶体降解系统,我们检测了该系统中的核心因子E3泛素蛋白连接酶c-Cbl的表达。Western blotting结果显示c-Cbl蛋白在B-CLL细胞中显著高表达,而依据real-time RT-PCR结果分析该现象为转录后现象。 利用RNA干扰技术对BJAB细胞系进行c-Cbl siRNA基因转染,流式细胞术检测基因沉默前后膜表面CD22表达,结果显示CD22表面表达明显下调,提示B-CLL细胞内增强的c-Cbl蛋白可能导致其表面CD22内在化和降解。免疫共沉淀c-Cbl及其相关的磷酸化酪氨酸激酶,确定PI3-kinase P85与c-Cbl在B-CLL细胞内具有明显的交互作用,且此作用随B-CLL重要预后判断因子ZAP70的表达升高而增强。此结果表明c-Cbl对P85的磷酸化更新可能是ZAP70阳性B-CLL患者的重要调控事件。 BCR相关基因和蛋白在外周血B细胞亚型及B-CLL细胞中的差异表达:为阐明BCR相关分子在B细胞发育过程中所发挥的作用,并推测B-CLL细胞的起源,我们利用CD19、CD27、和IgM作为荧光标记表型将外周血B细胞通过流式细胞术成功分选为naive B-cells、IgM memory B-cells(MZ B-cells)和switch memory B-cells三个亚型,分离提纯度达到90%。 以3个正常人外周血样本分选的B细胞亚型及B-CLL临床样本的mRNA为模板,对SIAE、c-Cbl、ST6Gal1、ZAP70、Syk和Lyn 6个基因的real-time RT-PCR结果分析确定在记忆性B细胞中SIAE和c-Cbl基因上调,而S T6Gall基因下调,而中SIAE是一种乙酰基酯酶,可特异性去除位于α2-6,端连接的唾液酸9-OH上的乙酰基部分,而睡液酸9-0-乙酰化状态可以调节CD22的功能。ST6Gall则是位于高尔基体上的唾液酸转移酶,可将CD22上包含的唾液酸配基O-乙酰基化。这两种蛋白酶对CD22的联合调控可能是记忆性B细胞的一种特性。B-CLL细胞过表达的Lyn和c-Cbl货白在不同类型B细胞中表达观察,揭示了Lyn蛋白的上调可能是由于B-CLL患者机体衰老引发的记忆性B细胞集聚所导致,而c-Cbl蛋白的表达不受基因调控,可能是B-CLL发让过程序中的关键事件。综上的述,能过对BCR抑制和激活通路以及c-Cbl与相关蛋白交互作用在B-CLL细胞中的研究结果,我们构建了B-CLL细胞内BCR相关因子及其信号通路表达与交互关系的动态平衡模型(见下图I)。在B-CLL细胞中,细胞表而表达BCR减少,但Lyn蛋白表达上调,过表达的Lyn包括有活性和无活性的Lyn两种状态。其中激活的Lyn磷酸化酷氨酸激酶Syk并造成BCR激活信号增强,而未活化的Lyn阻碍了CD22上ITIMs的磷酸化,导致发挥抑制作用的CD22显著降低,无法对SHP-1进行更新,并最终造成B-CLL细胞中BCR抑制信号通路的缺失。E3连接酶c-Cbl在B-CLL细胞明显高表达,并作用于表面的CD22,标记其发生细胞内吞作用,所造成的CD22内在化成为B-CLL的重要表型之一。C-Cbl还可磷酸化PI3-Kinase的功能调节部分P85,该现象受ZAP70表达的调控,可能潜在增强AKT和PKCδ信号通路的激活,为B-CLL细胞的异常集聚提供条件。此外通过对不同亚型B细胞BCR相关基因和蛋白表达的研究,阐述了SIAE、c-Cbl基因上调和S T6Gall基因下调具有成为记忆性B细胞标记的潜在的临床应用价值;而B-CLL细胞内,Lyn蛋白表达增强可能是机体衰老的表现,c-Cbl蛋白表达升高可能是肿瘤发生中的关键事件。
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q257

手机知网App
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邓家俭;王黎霞;安健;;鸡柔嫩艾美耳球虫对宿主细胞凋亡的影响[J];北京农学院学报;2011年02期
2 寇炜;吴静;赵晋;兰咏梅;窦春江;王爱勤;;D-氨基葡萄糖衍生物诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡的形态学变化[J];第四军医大学学报;2007年18期
3 朱颖;袁耀宗;;TRAIL及其受体促凋亡机制与消化道肿瘤治疗的前景[J];国际消化病杂志;2008年02期
4 李雪萍;张国建;李静;刘萍;朱天骄;顾谦群;;灵菌红素类化合物抗肿瘤活性研究进展[J];中国海洋药物;2012年01期
5 吴静,寇炜,高明太,周永宁,姬瑞,王爱勤,薛群基;D-氨基葡萄糖衍生物抑制HepG_2细胞生长及诱导凋亡的初步研究[J];肿瘤防治杂志;2005年16期
6 苏占涛;王先国;李杰;郏雁飞;郑燕;汪运山;;腺病毒介导RNAi抑制胃癌FU97细胞AFP基因表达的研究[J];中华肿瘤防治杂志;2010年07期
7 郇天笑;王泽;张辉;白增亮;;甲胎蛋白分子演化的生物信息学分析[J];山东大学学报(理学版);2007年03期
8 杜忠海;王士阳;孙长岗;;息贲胶囊对Lewis肺癌细胞增殖周期及端粒酶的影响[J];山东中医杂志;2010年08期
9 黄小龙;黄东益;周双清;吴繁花;陶思宇;;粘质沙雷氏菌产灵菌红素培养基的筛选[J];生物技术;2009年05期
10 王玉洁;孙诗清;朱长俊;刘晓侠;;天然红色素灵菌红素的抗菌性能及应用[J];天然产物研究与开发;2012年11期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 季明;B细胞淋巴瘤内miR-17-92基因转录调控机制研究[D];南京大学;2011年
2 杨连君;bcl-2和bax对肝癌细胞凋亡的调控及肝癌凋亡相关单克隆抗体初步研究[D];第四军医大学;2001年
3 赵云峰;四唑紫罗兰对大鼠胶质瘤C6细胞和小鼠乳腺癌C127细胞的细胞周期停滞和凋亡诱导的研究[D];山东大学;2005年
4 李雪萍;十一烷基灵菌红素(metacycloprodigiosin)的提取分离及抗肿瘤活性研究[D];中国海洋大学;2009年
5 魏莉;索拉非尼逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究[D];南方医科大学;2009年
6 郇天笑;肿瘤Biomarker的计算系统生物学研究及生物网络可视化软件的开发[D];山东大学;2010年
7 解洪荣;MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病模型的蛋白质组学研究[D];吉林大学;2010年
8 常彬霞;细胞色素P450 3A4、谷胱甘肽硫转移酶A1基因转染人肝细胞系的建立及功能测定[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
9 杨晓军;基于RNA干扰技术沉默AFP基因对肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究[D];兰州大学;2010年
10 王拱辰;γ-干扰素在肝癌免疫逃逸中的作用与机制的研究[D];大连医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晓燕;AFP在糖皮质激素诱导的大鼠结肠提前发育中的作用[D];南京医科大学;2009年
2 李圃;重组腺病毒Adv-AFPsiRNA的构建及其对卵巢癌生长抑制的实验研究[D];天津医科大学;2008年
3 李英秀;羟基喜树碱联用5-氟脲嘧啶、γ-干扰素、对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖诱导凋亡及凋亡相关基因表达的影响[D];延边大学;2003年
4 胡辉;低浓度乙醇抑制肝癌细胞增殖的研究[D];汕头大学;2005年
5 刘勇;环氧化酶-2在肝细胞肝癌中的表达及与多药耐药的相关性研究[D];重庆医科大学;2006年
6 黄色新;乙醇对人肝癌细胞系HepG2及其AFP、Survivin分子表达的影响[D];山东大学;2007年
7 胡超杰;G-蛋白表达水平与乙醇性脂肪肝发生发展及肝癌细胞系HepG2的增殖抑制关系的初步研究[D];安徽医科大学;2008年
8 陈彩霞;抗DR5抗体诱导鼠肝癌细胞凋亡的研究[D];厦门大学;2008年
9 吴亚芳;应用CpG-ODN免疫刺激进行慢性淋巴细胞白血病的染色体研究[D];苏州大学;2009年
10 赵环;七氟醚、异氟醚、安氟醚对体外培养HepG2细胞增值率和分泌甲胎蛋白的影响[D];广西医科大学;2009年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;人体细胞癌变揭秘[J];发明与革新;2000年01期
2 李承军;细胞癌变与DNA构象变化[J];吉林师范大学学报(自然科学版);1987年01期
3 郑正炯;细胞癌变与膜类脂双分子层液晶态相变的关系[J];自然杂志;1979年05期
4 刘曼焘;;细胞癌变的妙用[J];大科技(科学之谜);2009年04期
5 张致鹏;;癌变极有可能是自然的一种进化手段[J];大科技(科学之谜);2008年02期
6 冯振明;癌基因和抑癌基因对细胞癌变的调控[J];生物学教学;2000年08期
7 刘汉生;;癌症成因新看法——细胞返祖理论[J];大科技(科学之谜);2011年01期
8 唐开源;;干细胞·干细胞移植·细胞癌变——兼论阻断肠化恶变[J];科学中国人;2006年07期
9 王凡;与癌症作战[J];大自然探索;2000年10期
10 乐志培;;生物信息传递与细胞癌变[J];生命的化学;1989年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘林华;吴延;段慧菡;沈月兰;蒋义国;;MicroRNA在苯并[a]芘诱导支气管细胞癌变中的作用[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
2 时永香;苏玲;邵明;;《细胞-一个和谐的社会》通识教育核心课程体系[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
3 冯俊杰;郑坚瑜;;阿尔茨海默氏病相关基因APP与细胞癌变关系的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
4 方勤美;蒯学章;孙薇;姜颖;贺福初;;HBx相关细胞癌变的蛋白质组学研究[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
5 朱红梅;张大志;金生;任红;张晓艳;汤为学;;肿瘤细胞培养上清液诱导正常细胞癌变及可能机制探讨[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
6 杨巧媛;韩志远;吴延;赵垚;刘斌斌;李远奇;刘焕英;吴建军;蒋义国;;化学物诱导细胞癌变中microRNA致癌和抗癌机制[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
7 赵垚;刘焕英;李远奇;蒋义国;;miR-542-3p在反式二羟环氧苯并芘诱导支气管细胞癌变中的作用[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
8 张永虹;余万霰;;积极开展生物钟基因对癌细胞调控的研究[A];2004全国时间生物医学学术会议论文集[C];2004年
9 唐发清;田道法;白晶;周小军;龚志军;周辉;梁湘辉;吴尚辉;蒋海鹰;范学工;;中药益气解毒颗粒阻断鼻咽上皮细胞癌变的分子机制研究[A];2004'中华中医药科技成果专辑[C];2004年
10 郭瑞芳;吕有勇;臧师竹;胡伏莲;房静远;张亮;;EGR1基因过量表达和转位与胃黏膜病变演化及细胞癌变的关系[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 胡海;细胞癌变之谜被破解[N];科技日报;2004年
2 新文;英发现端粒酶可能致细胞癌变[N];中国医药报;2000年
3 ;吸烟是怎样致癌的[N];农村医药报(汉);2008年
4 陵军;加发现病毒可杀死癌细胞[N];中国医药报;2000年
5 肖陵军;病毒可杀灭癌细胞[N];经济信息时报;2000年
6 季卫华;彻底解除睡得香[N];中国质量报;2003年
7 天津市肿瘤医院预防医学中心科主任 刘俊田 整理 李运红 赵迎;未雨绸缪 三级防癌[N];健康报;2010年
8 李桂春;性与癌症关系密切[N];医药养生保健报;2007年
9 武昌杨园医院主任医师:罗云波;抗癌新法——吃生菜[N];湖北科技报;2002年
10 邱吉芬;“烫食”伤身[N];中国医药报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苏敏;TGF-βⅡ型受体异构体在HL-60和Molt-4细胞中的表达及其功能研究[D];福建医科大学;2012年
2 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
3 袁媛;K562细胞中Wnt5a介导不同受体途径激活经典或非经典Wnt信号通路及其机制的研究[D];第三军医大学;2011年
4 张博;BVAN08诱发肝癌细胞有丝分裂灾变死亡及放射增敏作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
5 舒清明;AFM观察人体肿瘤细胞膜形态特征及其诊断价值[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 胡旭东;BTG2基因在乳腺癌中的生物学功能与相关机制的研究[D];苏州大学;2010年
7 李仲杰;1:microRNAs参与7,8-二氢二醇-9,10-环氧苯并(a)芘诱发的FL细胞应答反应研究 2:地塞米松诱导的DNA聚合酶β过表达和反义阻断稳定细胞系的建立[D];浙江大学;2011年
8 吕俊锋;Decorin基因靶向抑制肺癌A549细胞及增强铂类药物杀伤效率的体外实验研究[D];吉林大学;2012年
9 李霞;N-ras癌基因5'端上游DNA特异结合蛋白的研究[D];中国协和医科大学;1991年
10 李延;新型活体流式细胞仪及其在循环肿瘤细胞研究中的应用[D];复旦大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马静红;应用细胞芯片捕获人肿瘤细胞并检测其细胞表面CD抗原表型的表达[D];中国医科大学;2010年
2 刘雪;中药复方对胃粘膜细胞癌变的抑制与逆转作用研究[D];青岛大学;2013年
3 杨帆;TGF-β1对AGS细胞上皮—间充质转化及体外侵袭的影响[D];山东大学;2010年
4 韦晔;DNA甲基化在氡致BEAS-2B细胞恶性转化过程中的作用[D];苏州大学;2014年
5 玄永哲;二十碳五烯酸协同长春瑞滨对A-549细胞作用研究[D];延边大学;2013年
6 李鹏;人支气管上皮细胞癌变株多种抑癌基因启动子的异常甲基化研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
7 刘文文;HL-60细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究[D];福建医科大学;2011年
8 杨旭;卵巢上皮性癌SKOV3细胞中休眠期细胞的干细胞属性的研究[D];河北医科大学;2012年
9 杨雪娇;CYP2A13在AFB1/AFG1所致BEAS-2B细胞急性损伤中的作用及机制[D];南京医科大学;2012年
10 陈延明;胶质瘤干细胞诱导神经胶质细胞癌变及相关机制研究[D];苏州大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026