收藏本站
《中国海洋大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

两种星鲽组织细胞系的建立及三丁基氧化锡对其毒性作用的研究

郭雪阳  
【摘要】:近年来,由于现代工农业的快速发展和人们保护环境意识的淡漠,包括有机锡化合物在内的大量有害物质通过陆源污染和海上污染等多种途径进入到海水中,给海洋环境造成了极大的破坏。这其中,三丁基氧化锡(TBTO)作为广泛应用于船体和渔网中的一种生物防附涂料,被认为是毒性最强的环境污染物和内分泌干扰物之一,其主要对水生生物的生长发育及体内组织和器官的功能造成较大影响,导致其大量死亡及繁殖力下降,严重威胁水生生物的种群资源及水产养殖业的发展,并可通过生物富作用,对人类健康造成极大威害。 圆斑星鲽Verasper variegatus (Temminck et Schegel)和条斑星鲽Verasper moseri (Jordan et Gilbert)隶属于硬骨鱼纲(Osteicthys),鲽形目(Pleuronectiformes),鲽科(Pleuronectidae),星鲽属(Verasper),均为大型冷温性底栖名贵鱼种。近年来,其养殖规模逐渐扩大,创造了巨大的经济价值,但同样深受包括TBTO在内的多种污染物的毒害。而鱼类细胞系作为一种细胞毒理学的体外研究工具,广泛应用于对海水中各种污染物进行检测,并且其与利用活体鱼进行的体内检测相比具有经济、灵敏、快速等优点,因此迫切需要建立星鲽的组织细胞系进行细胞毒理学的体外研究。但到目前为止,仍未有成功建立星鲽组织细胞系的研究报道。 为了建立星鲽的组织细胞系,本文分别采用0.5%透明质酸酶-0.2%Ⅱ型胶原酶联合消化和0.25%胰蛋白酶消化的方法对圆斑星鲽鳍组织和条斑星鲽鳃组织进行处理,并利用添加有50μg/mLN-乙酰葡萄糖盐酸盐、50μg/mL羧甲基壳寡糖、10ng/mL碱性成纤维样生长因子(bFGF)和40ng/mL I型胰岛素样生长因子(IGF-I)的含20%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12、Leibovitz's L-15和M199培养液(pH7.2)分别在18℃、22℃和26℃下进行了两种组织的体外培养。结果显示,圆斑星鲽鳍组织和条斑星鲽鳃组织的最适培养液均为含有上述添加物的20%FBS-DMEM/F-12 (pH7.2),最适培养温度均为22℃;在此最适条件下启动原代培养的结果显示,圆斑星鲽鳍组织和条斑星鲽鳃组织分别于启动培养7d和10d后便开始有细胞迁出,细胞形态均为成纤维样,生长分裂状态良好,并分别于第20d和第30d形成了汇合细胞单层;经传代后,两种组织细胞均能成功进行继代培养,圆斑星鲽鳍细胞现已传至第110代,条斑星鲽鳃细胞现已传至第70代,已成功建立了圆斑星鲽鳍细胞连续性细胞系(SHF01)和条斑星鲽鳃细胞的连续性细胞系(BFG01)。对两种细胞系细胞的生长特性分析结果显示,第60代圆斑星鲽鳍细胞和条斑星鲽鳃细胞的群体倍增时间分别为41.5h和54.4h,表明其生长分裂状态依然旺盛;对两种细胞系细胞的染色体分析结果显示,第60代两种星鲽组织细胞系细胞的染色体数目虽然出现了非整倍性,但其特征性染色体数仍均为46条。其中,圆斑星鲽鳍细胞系细胞具有46条染色体的比例为57.7%,并具有其典型的二倍体核型特征(46t),而条斑星鲽鳃细胞系细胞具有46条染色体的比例为68.3%,并具有其典型的正常二倍体核型特征(44t+2sm)。上述结果表明,本文所建立的两种细胞系确为圆斑星鲽鳍和条斑星鲽鳃连续性细胞系。 为研究三丁基氧化锡(TBTO)对两种星鲽细胞系细胞的毒性作用,本文选取0.5-64 ng/mL的TBTO分别对上述两种细胞系细胞进行了处理,并通过二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法和蛋白含量测定法检测了TBTO对两种细胞系细胞的毒性作用。MTT染色和蛋白含量测定结果显示,0.5ng/mL TBTO即可对两种细胞产生毒性作用,并表现出明显的剂量-效应关系。经计算TBTO对圆斑星鲽鳍细胞的48h半数抑制浓度(48h-IC50值)分别为41.58 ng/mL和44.49 ng/mL,而对条斑星鲽鳃细胞的48h-IC50值分别为37.07 ng/mL和39.48 ng/mL;对TBTO处理的条斑星鲽鳃细胞的酶活性测定结果显示,40ng/mL TBTO可引起条斑星鲽鳃细胞的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性显著变化。上述结果表明,TBTO对两种细胞系细胞的毒性作用具有浓度依赖性,其中条斑星鲽鳃细胞对TBTO的敏感性要高于圆斑星鲽鳍细胞,更适合用于TBTO的毒性作用研究,并且其SOD、GST和GSH-Px酶活性可以用作TBTO毒性作用的检测和评价指标。 综上所述,本文成功建立了圆斑星鲽鳍和条斑星鲽鳃的连续性细胞系,发现条斑星鲽鳃细胞对TBTO具有更高的敏感性,其SOD、GST和GSH-Px可以用作TBTO毒性作用的检测和评价指标。本文研究结果为进一步研究TBTO对星鲽细胞毒性作用的机理奠定了基础,不仅对环境毒理学的体外研究具有重要的理论意义,而且对符合国家标准、快速灵敏的有机锡污染物毒性检测体系的建立还具有重要的理论指导价值。
【学位授予单位】:中国海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S917.4

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜泽东;周伯文;段晶晶;;鱼类细胞培养的研究与应用[J];北京水产;2008年03期
2 左文功;;淡水鱼类细胞培养方法[J];淡水渔业;1991年02期
3 林旋;张伟妮;林树根;蒋丹萍;王寿昆;;欧洲鳗鲡皮肤、鳃及消化道粘液细胞的分布与类型[J];福建农业学报;2008年01期
4 闫建国;汝少国;邴欣;王蔚;;久效磷对黄鳝过氧化氢酶和Na~+,K~+-ATP酶活性的影响[J];环境科学研究;2006年03期
5 吴峰,邓南圣,程雅芳;环境中内分泌干扰物质的研究概述[J];环境污染与防治;2002年03期
6 杜永兵;李远友;禹龙香;郑一军;胡长博;陈伟洲;孙泽伟;章跃陵;;三丁基锡对蓝子鱼的激素和酶指标及组织显微结构的影响[J];环境科学学报;2007年05期
7 宿烽;张士璀;李红岩;郭华荣;;In vitro acute cytotoxicity of neonicotinoid insecticide imidacloprid to gill cell line of flounder Paralichthy olivaceus[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2007年02期
8 林志芬;王连生;钟萍;殷克东;杜建伟;;海洋中有毒有机污染物的监测方法研究进展[J];海洋环境科学;2006年01期
9 江桂斌,徐福正,何滨,刘稷燕,周群芳,郭磊,张福军,吴迪;有机锡化合物测定方法研究进展[J];海洋环境科学;1999年03期
10 魏渲辉,汝少国,姜明,魏建功,李永祺;有机磷农药对鱼类的毒性效应及内分泌扰乱作用[J];海洋科学;2002年09期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 宿烽;有机锡化合物和烟碱类杀虫剂对牙鲆鱼鳃细胞株(系)的毒性效应与机理研究[D];中国海洋大学;2005年
2 朱丽岩;几种环境内分泌干扰物对青岛近海常见海洋动物的毒性效应[D];中国海洋大学;2005年
3 谭凤霞;三株鱼类细胞系的建立和十二株鱼类细胞系对重金属毒性的敏感性研究[D];华中农业大学;2008年
4 王贤丽;几种重要海水养殖鱼类细胞系的建立、诱导分化及其应用研究[D];中国海洋大学;2009年
5 魏云波;褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)三种细胞系的建立、病毒敏感性以及环境污染物对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王轶敏;王新庄;李金辉;李义书;冯勋伟;;不同培养系统和传代方法对昆明白小鼠原始生殖细胞分离培养的影响[J];安徽农业科学;2008年12期
2 杨素芳;崔奎青;陈华海;韦精卫;韦兰锋;石德顺;;兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测[J];安徽农业科学;2008年13期
3 刘萍;王海飞;汪劲能;陆艳凤;赵西彪;丁家桐;;Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究[J];安徽农业科学;2008年15期
4 董社琴;李冰雯;;对节白蜡愈伤组织诱导的研究[J];安徽农业科学;2008年26期
5 王怡;管鹏飞;薛整风;成勇;;利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别[J];安徽农业科学;2009年16期
6 赵彩平;丁毅;叶云;李玉成;;淮河中下游干流贝类体中多环芳烃的分布及风险评价[J];安徽农业科学;2010年03期
7 毕琳;李键;王中乾;;小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期
8 崔莹莹;吴东明;李月红;付云红;;鲤鱼上皮细胞在不同培养条件下的生长状况及与哺乳动物细胞的比较[J];安徽农业科学;2010年24期
9 张阳;王庆奎;陈成勋;郭永军;白东清;邢克智;;尾部溃烂与健康的半滑舌鳎血液生理生化指标的比较[J];安徽农业科学;2011年10期
10 周德存;;人幼儿心肌细胞体外培养的实验研究[J];安徽医学;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘军;;危机管理视角下的蓝色经济区建设[A];东方行政论坛(第一辑)[C];2011年
2 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
3 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
4 王涛;林志芬;尹大强;殷克东;;C_(18)Empore~(TM)膜仿生萃取技术检测水产养殖区水体有毒有机污染物的新方法[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
5 胡家会;张玉博;周荣荣;张永忠;;有机磷杀虫剂甲基异硫磷对玫瑰无须鲃精子的体外毒性研究[A];有毒化学污染物监测与风险管理技术交流研讨会论文集[C];2008年
6 丛柏林;黄晓航;柴迎梅;刘胜浩;刘晨临;;孔鳐胰脏单层细胞的制备和外源基因的表达[A];中国海洋学会海洋生物工程专业委员会2005年学术年会论文集[C];2005年
7 郑在予;;欧洲鳗鲡组织细胞体外培养初步研究[A];2008年福建省科协第八届学术年会农业分会场论文集[C];2008年
8 曹仲宏;;EDCs研究概述[A];2007年全国给水排水技术信息网成立三十五周年纪念专集暨年会论文集[C];2007年
9 王林美;范琦;张波;叶博;赵振军;李树英;;柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法的研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(3)[C];2009年
10 赵康峰;郭宝岚;张少平;孔建;治洪;刘景兰;张月;李毅民;;脑星型胶质细胞改进培养法[A];中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第六届全国学术会议、中国毒理学会遗传毒理专业委员会第五届全国学术会议、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会学术会议、广东省环境诱变剂学会学术会议论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
2 李大良;资源与环境约束下我国渔业发展战略研究[D];中国海洋大学;2010年
3 姚丹;久效磷对马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)胚胎发育神经毒性效应研究[D];中国海洋大学;2010年
4 孙爱;大黄鱼(Pseudosciaena crocea)三种组织细胞系的建立、鉴定及其应用的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
5 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
6 林源吉;K562及其耐药株K562/A02细胞膜蛋白与耐药机理的研究[D];浙江大学;2010年
7 杜瑞平;t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪沉积的差异性调控机理研究[D];内蒙古农业大学;2010年
8 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 于贞;三种海洋滤食动物对有机磷农药的反应及降解[D];大连理工大学;2011年
10 袁烁;化瘀消癥杀胚法对输卵管妊娠影响的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 田振华;伴与不伴脂肪细胞共培养状态下IL-6对人单核/巨噬细胞增殖和功能的影响[D];南京医科大学;2009年
3 宋晓娣;笋用竹的组织培养研究[D];中南林业科技大学;2009年
4 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年
5 何淑玲;红芪高产配套栽培技术试验研究[D];甘肃农业大学;2010年
6 王云丹;阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响[D];湖南中医药大学;2010年
7 李永忠;壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究[D];湖南中医药大学;2010年
8 赵国燕;壳聚糖衍生物对角膜细胞生长影响的研究[D];中国海洋大学;2010年
9 鲍腾飞;铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究[D];浙江农林大学;2010年
10 景毅;条斑星鲽(Verasper moseri)卵巢细胞系的建立及几种内分泌干扰物对其生殖与遗传毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王晓峰,傅文宇,朱欣,徐立红;六价铬对大鼠肝细胞体外的毒作用[J];癌变.畸变.突变;2005年06期
2 闫建国;汝少国;王蔚;;久效磷对黄鳝乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和磷酸酶活性的影响[J];安全与环境学报;2006年03期
3 柳敏海;罗海忠;陈波;彭志兰;傅荣兵;;铜、镉对鮸鱼幼鱼鳃丝Na~+-K~+-ATPase和肝脏SOD酶活性的影响[J];安全与环境学报;2007年04期
4 侯琳,辛萍,石秉霞;脑卒中病人Na+-K+-ATPase活性及SOD水平检测[J];青岛医学院学报;1996年03期
5 王铁辉,张义兵,李戈强,易泳兰,刘汉勤,朱作言;鱼类培养细胞干扰素的诱导[J];病毒学报;1999年01期
6 刘凌云;草鱼染色体组型的研究[J];动物学报;1980年02期
7 尹苗,杨桂文,安利国;胡子鲶粘液细胞类型及其在消化道中的分布[J];动物学报;2001年S1期
8 ;山东沿海单环刺虫益繁殖生物学的研究[J];动物学报;1997年04期
9 尹苗,安利国,杨桂文,孟广勋,冯程强;鲤鱼粘液细胞类型的研究[J];动物学杂志;2000年01期
10 梁幼生,熊希凯,宋鸿焘,肖荣炜,叶嘉馥,张家楷,梅方雄;冬季水淹后洲滩钉螺组织化学与超微结构的变化[J];动物学杂志;1994年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 胡金朝;重金属污染对不同生境水生植物的毒害机理研究[D];南京师范大学;2006年
2 肖勤;壬基酚对玫瑰无须鲃及牙鲆鳃细胞系的毒性效应[D];中国海洋大学;2006年
3 柏世军;水环境镉对罗非鱼的毒性作用和机理探讨[D];浙江大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于大国,邱永成;星鲽的养殖[J];齐鲁渔业;2003年03期
2 ;星鲽种苗生产获得成功[J];齐鲁渔业;1997年04期
3 王长青;我国星鲽苗种人工培育获成功[J];畜牧兽医科技信息;2003年02期
4 杜佳垠;日本条斑星鲽养殖[J];渔业现代化;2003年02期
5 于大国;新品种推荐──星鲽的养殖[J];中国水产;2001年10期
6 李全海;十里海引进星鲽[J];渔业致富指南;2005年19期
7 张守本;张志;任玉水;马康;;条斑星鲽工厂化养殖技术[J];科学养鱼;2007年06期
8 宫春光;陈福杰;于清海;;工厂化养殖条斑星鲽的病害及防治[J];科学养鱼;2009年01期
9 窦硕增,杨纪明,陈大刚;渤海石鲽、星鲽、高眼鲽及焦氏舌鳎的食性[J];水产学报;1992年02期
10 ;渔业纵览[J];科学养鱼;2002年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 苏浩;赫崇波;高翔刚;李云峰;;条斑星鲽的繁育及养殖技术研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 樊拥军;张凤蕴;陈君平;;MBP特异性T细胞系的建立(英文)[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
3 蒋雯;张建;张彩;田志刚;;人IL-15基因修饰NKL细胞系的生物学特性研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
4 李林芳;王敬晗;苏长青;刘辰;姜小清;钱其军;;首株来源于转移灶的人胆囊癌细胞系EH-GB1的建立及鉴定[A];中国抗癌协会胆道肿瘤专业委员会成立大会暨第一届全国胆道肿瘤学术会议论文集[C];2009年
5 沈原;赵永波;;人SNCA基因过表达慢病毒载体构建及稳定转染293T细胞系的建立[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
6 李文鑫;曾灵芳;沈瑞忠;王永潮;;人小肠癌无血清培养细胞系HICMA/s~-的建立及其生物学特征[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
7 颜林;潘李珍;陈佩惠;;三带喙库蚊细胞系的建立及其特性研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 耿敬姝;薛英威;刘秀华;刘立人;高晓敏;赵家宏;;人肝细胞癌细胞系—HHC-98的建立及生物学特性[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
9 陈贵安;彭红梅;;人类胚胎干细胞系的建立及其初步分化研究[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
10 娄晓敏;肖汀;汪浩;郭素萍;赵康;程书钧;刘斯奇;高燕宁;徐宁志;;永生化的人支气管上皮细胞系M-BE的蛋白质组学分析[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张晓晶;国家海水养殖种子工程落户山东[N];经济参考报;2003年
2 赵卓昀;DNA结果已出,黄禹锡论文纯属造假[N];新华每日电讯;2005年
3 吴一福;我国建立首株HCC-7721/VCR细胞系[N];中国医药报;2006年
4 吴一福;四医大建成出血热B淋巴母细胞样细胞系[N];中国医药报;2006年
5 张中桥;西京医院建立稳定表达MAGE-n细胞系[N];中国医药报;2006年
6 吴一福;四军医大成功建立HCV多表位基因P815细胞系[N];中国医药报;2006年
7 王建新;新加坡研制出符合临床要求人体胚胎干细胞系[N];新华每日电讯;2006年
8 吴一福;四军医大建成传代百次人骨巨细胞瘤细胞系[N];中国医药报;2006年
9 记者 毛黎;2008年10大科学突破[N];科技日报;2008年
10 ;美国科学家发出警告 现有人类胚胎干细胞系已被污染[N];医药经济报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 魏云波;褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)三种细胞系的建立、病毒敏感性以及环境污染物对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2009年
2 罗洪波;COX-2基因在人前列腺癌细胞中的表达及其选择性抑制剂的作用研究[D];中南大学;2003年
3 陈修煦;人结肠癌细胞系对5-氟尿嘧啶(5-FU)与顺铂(CDDP)敏感性相关分子标记研究[D];浙江大学;2002年
4 李文;沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长和血管生成的影响[D];四川大学;2004年
5 王凤玮;辐射与鼻咽癌细胞凋亡及其相关基因表达关系的研究[D];中国协和医科大学;1997年
6 陈军;人Fas Ligand cDNA的克隆、表达对HepC_2细胞系细胞凋亡影响[D];中南大学;2003年
7 姜润德;人鼻咽癌顺铂耐药细胞系(CNE-2/CDDP)的建立及耐药相关基因的筛选[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
8 陶欣荣;人骨髓间充质干细胞分化潜能的探讨[D];第二军医大学;2005年
9 邱慧颖;小鼠骨髓多能干细胞建系及其造血重建作用的研究[D];第二军医大学;2005年
10 陆琳;人子宫内膜癌细胞系的建立及其特异性结合短肽的筛选[D];暨南大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭雪阳;两种星鲽组织细胞系的建立及三丁基氧化锡对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 徐晓辉;两种星鲽组织细胞系的建立及久效磷对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 高翔;条斑星鲽全人工繁育技术研究[D];中国海洋大学;2009年
4 倪娜;养殖雌性条斑星鲽(Verasper moseri)生殖生理的初步研究[D];中国海洋大学;2011年
5 金国雄;条斑星鲽雄鱼繁殖内分泌机理初步研究[D];中国海洋大学;2010年
6 景毅;条斑星鲽(Verasper moseri)卵巢细胞系的建立及几种内分泌干扰物对其生殖与遗传毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 高强;转神经生长因子基因诱导神经母细胞瘤分化的研究[D];青岛大学;2004年
8 朱晓英;人舌鳞状细胞癌脊髓转移细胞系Ts的建立和生物学特性[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 郝希伟;神经母细胞瘤细胞系的建立、生物学检测和荷瘤鼠模型建立的实验研究[D];青岛大学;2005年
10 秦冰;三种细胞系中DNA聚合酶β基因片段的克隆及序列分析[D];郑州大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026